植物组织过氧化物酶活性测定（比色法）.ppt

植物生理学实验指导 江月玲 实验十(4)过氧化物酶活性测定（比色法） 过氧化物酶简介 　　 在通常的情况下，需氧生物在还原氧至水的过程中会产生O2，植物细胞中电子传递部通畅时，也会产生O2-（超氧物阴离子自由基）、· OH、1O2（单线态氧）及它们诱导产生的H2O2会直接或间接启动脂膜的过氧化作用，导致膜的损伤和破坏。 过氧化物酶简介 　过氧化物酶广泛存在于植物体中，是生物体内存在的一种防护氧自由基对细胞膜系统伤害的酶，对细胞膜产生过氧化物的破坏有保护作用，在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化。 　　一般老化组织中活性较高，幼嫩组织中活性较弱,所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标。 一、实验目的 二、实验原理 4 H2O2 + 4 愈创木酚 → 4-邻甲氧基苯酚 材料：番茄幼苗 试剂：0.05M磷酸缓冲液，PH5.5；0.05M 愈创木酚；2% H2O2；20%三氯乙酸 五、结果计算 以每分钟光密度变化值表示过氧化物酶活性大小. ∑(ODn – ODn-1) 过氧化物酶活性= ——————————— 鲜重（g) ×反应时间（min) 思考题 1、 测定过氧化物酶活性有何生理意义？ 2、本实验方法有何优缺点？该如何改进？ * 广州大学生命科学学院 （多媒体课件） 1. 熟悉测定过氧化物酶活性的常用比色法。 2. 了解测定过氧化物酶活性的生理意义。 4 H2O2 + 4 O CH3 OH POX O CH3 O O CH3 O O CH3 O O O CH3 O O CH3 （邻甲氧基苯酚） （无色） （红棕色） （470nm） 三、材料用具及仪器药品 四、操作步骤 1. 酶液的提取： ０．3g材料 研磨 匀浆 离心（4000转/分） 活性炭脱色 上清液待用 2 . 比色，测光密度值： 调波长、调零，先往比色杯中加入2ml的反应液，放进比色计，然后快速地加入1ml的酶液，计时，先读第一个原始数据，然后每30秒读一次，共读5个数据。 过氧化物酶活性单位：△OD470/min·g FW 图1 过氧化物酶活性与反应时间的关系曲线 *