日本岛津UV2550分光光度计 操作培训技巧.ppt

山东安和安全技术研究院有限公司 检测部 Tel: (0543) 3065070 E_mail: bzsa163.com 紫外-可见吸收光谱 电磁波谱 能级跃迁示意图 电磁波与分子相互作用时产生能级跃迁： 吸收光谱的测量Lambert-Beer 定律 紫外-可见分光光度计仪器组成 UV示意图 分析条件选择 紫外-可见分光光度法的应用 二、定量分析步骤（标准曲线法） 先开主机，然后再打开UVPROBE软件； 启动UVPROBE以后，点击界面下方“连接”进行仪器连接，仪器进行连接检查，待检查全部通过后，点击“OK” 点击“光度测定”； 点击“方法”，波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长,然后加入波长，类型多选择为“多点”，WL1=最大波长。 点击“下一步”，（注：根据所测样品对相应的参数进行设定），“方法”设定完后，点击“关闭”； 将两个空白参比放入光束吸收池架； 点击“自动调零”； 双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活； 点击下拉菜单中的I-扣空白； 在标准表中依次输入标准系列ID； 读取标准样品：将两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”-“属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线； 样品读取：点击样品表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活； 在样品表中输入样品ID，放入待测样品，进行“读取 ”。 打印结果：点击文件-打印-（选择打印标准表或样品表） 关机：点击操作界面“断开”，然后关闭仪器电源，关闭操作软件，关闭电脑，将比色皿倒扣放置保存。 紫外-可见分光光度计的维护与保养 二、工作台要求 １、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） ２、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm 三、电源要求 １、供电电压：100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz ２、功率消耗：约190VA ３、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220-240V供电，3.15A ４、安装地点具备可靠的仪器接地端子 分光光度计的校正 当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对其进行校正。 波长标度校正： 使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为二者均有其各自的特征吸收峰。 吸光度标度校正： 采用 K2CrO4 标准液校正（在15oC时，于不同波长处测定0.04000g/L的 KOH 溶液（0.05mol/L）的吸光度 A，调整光度计使其A 达到指定的吸光度。 一、仪器测量条件 由于光源不稳定性、读数不准等带来的误差。当分析高浓度的样品时，误差更大。 由L-B定律： 微分后得： 将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为?T 和 ?c，得 当相对误差 ?c/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434 时，吸光度读数误差最小！ 通常可通过调节溶液浓度或改变光程b来控制A的读数在0.15~1.00范围内。 二、反应条件选择 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 ? 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量： 配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格控制。 3. 溶液酸度：配位数和水解等与 pH 有关。 4. 显色时间、温度、放置时间等。 三、参比液选择 1.溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 2.试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作参比（不加待测物）； 3.试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时，可以试样作参比（不能加显色剂）。 四、干扰消除 1. 控制酸度： 配合物稳定性与pH有关，可以通过控制酸度提高反应选择性，副反应减少，而主反应进行完全。如在0.5MH2SO4介质中，双硫腙与Hg2+生成稳定有色配合物，而与Pb2+、Cu2+、Ni3+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。 2. 选择掩蔽剂 3. 合适测量波长 4. 干扰物分离 5. 导数光谱及双波长技术 一、定性分析 不同物质结构不同或者说其分子能级的能量(各种能级能量总和)或能量间隔各异，因此不同物质将选择性地吸收不同波长或能量的外来辐射，这是UV-Vis定性分析的基础。