甘遂治疗重症急性胰腺炎的实验与临床研究-外科学专业论文.docx

摘要第一章甘遂治疗重症急性胰腺炎的实验研究背景重症急性胰腺炎(SAP)是临床常见急腹症，起病急、病情重、病死率高。其发病机制尚未完全明了，治疗也在不断研究探索中。近年来研究发现，核因子一KB(NF—KB)与炎症介质在急性胰腺炎的发生发展中起着重要作用。急性胰腺炎早期就存在着微循环障碍，并成为其持续性和加剧损害的重要因素。抑制炎症介质的过度释放和改善胰腺微循环是治疗SAP的两条重要途径。我科应用中药甘遂治疗SAP取得良好效果，但其作用机理尚不甚清楚。现代研究表明甘遂有免疫抑制、抗炎、改善胃肠道微循环等作用。因此，我们设想，甘遂治疗SAP的作用机理可能与抑制炎症介质的过度释放和改善胰腺微循环有关。为此，我们设计动物实验，旨在探讨甘遂对SAP的作用机理，为临床应用甘遂治疗SAP提供理论基础。方法将sD大鼠120只随机分为3组：(1)假手术组(S组)：40只，只进行麻醉及开腹，不制作重症急性胰腺炎模型，也不予甘遂治疗；(2)重症急性胰腺炎组(SAP组)：40只，制作重症急性胰腺炎模型，但不予甘遂治疗；(3)甘遂治疗组(K组)：40只，制作重症急性胰腺炎模型后给予甘遂治疗。各组在手术后2、6、12、24小时分别采集血标本和组织标本，进行下列指标检测：(1)血清淀粉酶水平；(2)血清TNF。和IL一6水平；(3)血浆和胰腺组织TXB：、6-Keto—PGF-。水平；(4)胰腺组织NF—K B／P65蛋白的表达；(5)胰腺组织COX一2的表达；(6)胰腺、肺脏、肝脏、肾脏组织HE染色光镜检查；(7)胰腺组织电镜检查；(8)各组术后72小时死亡率。结果(1)血清淀粉酶：与S组比较，SAP组2小时就显著升高，24小时达高峰，均显著高于s组(P0．01)；K组与SAP组比较，除2小时外，其余各时间点均有显著降低(P0．01)，但仍高于对照组(PO．01)。(2)血清TNF。和IL-6：与S组比较，SAP组2小时就显著升高，12小时达高峰，24小时有下降，但均显著高于S组(P0．01)；K组与SAP组比较，除2小时外，其余各时间点均有显著降低(PO．01)，但仍高于对照组(P0．01)。(3)胰腺组织和血浆TXB。、6-Keto—PGF．。水平及TXB。／6一Keto—PGF。。比值：与s组比较，SAP 组TXBz水平在2小时就显著升高，6小时达峰值，以后仍维持在较高水平(PO．01)；6-Keto—PGF。。水平在2小时有升高，以后各时间点变化不大，但均显著高于S组(P0．01)；TXB：／6-Keto—PGF。。比值于2小时有显著升高，6小时达高峰，并持续至24小时(P0．01)。K组TXBz水平较SAP组6、12、24小时点有显著降低(P0．01)；6-Keto—PGF、。在各时间点无明显变化(P0．05)；TXB。／6一Keto—PGF．。比值较SAP组6、12、24小时点有显著降低(P0．01)，但仍高于对照组(PO．01)。(4)NF—K B／P“蛋白免疫组化结果：S组阳性表达罕见；SAP组阳性表达明显，6小时达表达高峰，12小时后表达逐渐减弱；K组在6、12小时表达均明显弱于SAP组(PO．05)；24小时点各组差异不明显。(5)核内NF—KB／P65蛋白Western检测结果：s组表达量极弱：SAP组在2小时表达量明显增强，6小时达高峰，12小时后表达逐渐减弱；K组在6、12小时表达量均显著低于SAP组(P0．01)；24小时点各组差异不明显。(6)COX一2的mRNA表达：s组阳性表达罕见：SAP组阳性表达明显，6小时表达最强，12小时后表达逐渐减弱；K组在6、12小时表达均明显弱于SAP组(PO．05)：24小时点各组差异不明显。(7)COX一2蛋白的表达：S组表达量极弱：SAP组在2小时表达量明显增强，6小时达高峰，12小时后表达逐渐降低；K组在6、12、24小时表达量均显著低于SAP组(PO．01)。(8)相关性分析：胰腺组织TXB。／6一Keto-PGF．。比值与COX一2蛋白表II达呈显著正相关(r=0．867，P0．01)。(9)光镜观察：①胰腺组织：SAP组出血坏死及炎性细胞浸润，并随时间延长而加重；K组2、6小时点与SAP组没有明显差别，12小时后，胰腺组织损害较SAP组减轻。②肺组织(24小时点)：SAP组肺问质水肿增厚，肺泡壁破坏，间质出血，大量炎细胞浸润；K组肺组织损害程度较SAP组减轻。⑧肾组织(24小时点)：SAP组肾小管细胞肿胀，部分有变性坏死，肾间质出血，中性粒细胞浸润；K组组织损害程度较SAP组减轻。④肝组织(24小时点)：SAP组肝细胞肿胀，部分变性坏死，中性粒细胞浸润；K组肝组织损害程度较SAP组减轻。(10)胰腺组织电镜检查：S组胰腺组织腺泡结构正常；SAP组线粒体空泡化，内质网排列紊乱，核固