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GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50300.1 v.A GENMED细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 GENMED细胞乙醛脱氢酶2活性比色法定量检测试剂盒是一种旨在使用乙醛脱氢酶2敏感性抑制剂，通过检测反应系统中氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）乙醛脱氢酶aldehyde dehydrogenase；ALDH；EC），又称为乙醛NAD氧化还原酶（aldehyde NAD－oxidoreductase）是一类NAD（P）依赖性酶，催化广谱的外源性或内源性脂肪族乙醛生物胺biogenic amine）乙醛脱氢酶分解乙醛脱氢酶把乙醛中的两个氢原子脱掉，使乙醛转化为乙酸，乙醛脱氢酶主要有两种同工酶：ALDH1和ALDH2。ALDH1存在于胞液中，ALDH2存在于线粒体中，ALDH2比ALDH1的活性高。乙醛脱氢酶的缺少，使酒精不能被完全分解为水和二氧化碳，而是以乙醛继续留在体内，使人喝酒后产生恶心欲吐、昏迷不适等醉酒症状。acetaldehyde），在7-羟基-3-（4-羟苯基）-异黄酮-7-糖苷Daidzein-7-O-β-D-glucopyranoside；Daidzin）存在与否的情况下，由乙醛脱氢酶 nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）的变化（340nm 波长），来定量分析乙醛脱氢酶乙醛脱氢酶CH3OH + NAD+ + H2O → CH3COOH + NADH + H+ Daidzin 产品内容 GENMED清理液（Reagent A） 毫升 GENMED裂解液（Reagent B） 毫升 GENMED缓冲液（Reagent C） 毫升 GENMED反应液（Reagent D） 毫升 GENMED底物液（Reagent E） 毫升 GENMED阴性液（Reagent F） 毫升 GENMED专性液（Reagent G） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存GENMED缓冲液（Reagent C）、GENMED反应液（Reagent D）、GENMED底物液（Reagent E）和GENMED专性液（Reagent G）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；GENMED反应液（Reagent D）和GENMED底物液（Reagent E）避免光照；有效保证6月 用户自备 1.5毫升离心管：用于样品保存的容器 15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器 细胞刮脱棒：用于脱离贴壁细胞 （微型）台式离心机：用于样品制备 比色皿或酶标板：用于比色的容器 分光光度仪或酶标仪：用于比色分析 实验步骤 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED裂解液（Reagent B）置入冰槽里。然后进行下列操作。 样品准备 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 106细胞） 小心加入毫升GENMED清理液（Reagent A），覆盖生长表面 小心抽去清理液 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化） 加入毫升GENMED清理液（Reagent A），混匀细胞 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始） 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g 小心抽去上清液 加入微升GENMED裂解液（Reagent B），充分混匀 转移到预冷的1.5毫升离心管 强力涡旋震荡15秒 置于冰槽里孵育30分钟 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415） 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用GENMED Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－GMS30030.1） 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作 测定准备 开启并设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，间隔60秒，读数5次（共5分钟），并置零 从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；GENMED底物液（Reagent E）避免光照GENMED缓冲液（Reagent C） 背景对照测定 移取微升GENMED缓冲液（Reagent C）到新的比色皿 加入微升GENMED反应液（Reagent D） 加入微升GENMED底物液（Reagent E） 在25℃温度下孵