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分子标记技术 分子标记的概念 广义的分子标记(molecular marker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。 狭义的分子标记概念只是指DNA标记，是能反映生物个体或者种群间基因组中某种差异特征的DNA 片段，它直接反映基因组DNA间的差异。 分子标记的特点 （1）直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育 阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与 否等问题； （2）数量极多，遍布整个基因组，可检测座位几乎无限； （3）多态性高，自然界存在许多等位变异，无须人为创造； （4）表现为中性，不影响目标性状的表达； （5）许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。 分子标记类型 ①基于杂交的分子标记，如RFLP ②基于 DNA序列和芯片的分子标记，SNP ③基于 PCR的分子标记，如RAPD、SSR、ISSR等 分子标记的应用 1、遗传图谱构建 2、基因定位研究 3、在物种亲缘关系和系统分类中的应用 4、分子标记辅助育种 王老师近年发表关于分子标记的文章 1、Lu JJ， Wang S， Zhao HY，Liu JJ，Wang HZ*，Genetic linkage map of EST-SSR and SRAP markers in the endangered Chinese endemic herb Dendrobium (Orchidaceae)，Journal of Plant Research，2012 (Revised) (SCI) 2、Lu JJ, Zhao HY, Suo NN, Wang S, Shen B, Wang HZ*, Liu JJ, 2012,Genetic linkage maps of Dendrobium nobile and D. moniliforme based on EST-SSR,SRAP, ISSR and RAPD markers, Scientia Horticulturae, 137:1-10(SCI) 3、Xue DW, Feng SG, Zhao HY, Jiang H, Shen B, Shi NN, Lu JJ, Liu JJ, Wang HZ*.2010, The linkage maps of Dendrobium species based on RAPD and SRAP markers, Journal of Genetics and Genomics. 37(3):197-204（SCI） 4、Wang HZ*,Wu ZX, Lu JJ, Shi NN, Zhao Y, Zhang ZT, Liu JJ.2009,Molecular diversity and relationships among Cymbidium goeringii cultivars based on inter-simplesequence repeat (ISSR) markers. Genetica, 136(3):391–399（SCI） RAPD分子标记技术 S43引物对14种兰属植物扩增结果 一、实验原理 RAPD(randomly amplifiled polymorphic DNA,随机扩增的多态性DNA)建立于PCR基础上，它是利用一系列(通常数百个)不同的随机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链(通常为十聚体)为引物，对所研究基因组DNA进行PCR扩增,聚丙烯酰胺或琼脂糖电泳分离检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增产物DNA片段的多态性反应了基因组相应区域的DNA多态性。 RAPD标记特点 1、引物随机，无需专门设计。 2、PCR引物没有种属限制。 3、最初的反应中退货温度较低，一般为36℃。 4、操作技术简便。 5、DNA样品需要较少，成本较低。 6、显性遗传，不能鉴别杂合子与纯合子。 7、某些情况下实验结果重复性较低。 二、实验试剂 植物基因组DNA、随机引物（10mer）、Tap 酶 、10×PCR缓冲液（含Mg2+ ）、dNTP、ddH2O 三、操作步骤 （1）在20μl反应体系中，加入 10×PCR缓冲液 2 μl dNTP 0.8 μl 随机引物 1 μl Tap 酶 1.2 μl 模板DNA 1 μl ddH2O 14 μl （2）PCR反应程序： 94 ℃ 2min