梅毒实验检测-检验科讲解材料.ppt

梅毒的实验室诊断;梅毒概况;梅毒的分期;生物学特性; Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对Ⅰ期梅毒末期以后（大约感染3—4周以后）的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。 检验方法： 1、? 显微镜镜检 渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合ⅠⅡ期梅毒的检查。（现已经不常用） 2、? 血清学试验 包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类 1）? 非螺旋体抗体试验（NtrAT） 用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。 2）? 密螺旋体抗体试验（TrAT） 采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。;梅毒的治疗;暗视野显微镜检查法：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特异的一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在3周内不同的3天采样检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊断的准确性受操作者的经验、病灶中活螺旋体的数量及口腔、肛门破损处存在的非致病性螺旋体等因素影响 镀银染色法：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察 直接免疫荧光法（DFA)：是目前国外采用较多的方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其他非致病性或条件致病性螺旋体;聚合酶链反应（PCR）：PCR能对生殖器溃疡进行早期的鉴别诊断，区分梅毒、生殖器疱疹和软下疳。它又可分为PCR和RT-PCR。PCR的设计主要针对编码梅毒螺旋特异性抗原和TpN47的DNA开放编码区，常见的引物有K03A、K04、47-1、47-2、47-3、47-4等。由于在PCR中会偶然出现非特异的PCR产物而干扰结果，这就必须用特异性的DNA探针进行DNA-DNA杂交来提高PCR的特异性及敏感性。此外，由于TpN47的保守性，雅司螺旋体可产生类似的PCR产物，所以这??设计的PCR不能区分梅毒和雅司；但可以区分梅毒螺旋体和引博氏疏螺旋体，这就可以解决梅毒与莱姆病之间血清诊断中的免疫交叉问题。另一种是RT-PCR，常见的设计是针对梅毒螺旋体的16s rRNA 366bp片段，这种方法污染少，特异性敏感性高，但价格稍高。PCR在梅毒持续感染中的诊断价值目前尚无一致意见，理论上PCR可查出死亡的TP，所以治疗后PCR阳性并不意味着治疗失败，但死亡的TP从机体内清除较快（15～30天），而存活的TP从机体内清除至少需120天，所以治疗数周后PCR阳性意味着持续感染的可能 。此外，也有将PCR用于产前诊断和神经梅毒诊断的报道 ;梅毒的免疫性（二）;NTrAT非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试验，原理基本相同 1、性病研究实验室玻片试验（VDRL) ：试剂需现配现用，且要在显微镜下观察结果，故国内实验室很少采用。但VDRL是诊断神经性梅毒最特异的血清学方法 2、不加热血清反应素试验（USR)：试剂无需现配现用，但仍要在显微镜下观察结果，现已很少使用 3、快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)：在特制的纸片上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现凝集，用肉眼可观察结果 4、甲苯胺红不加热试验（TRUST)：在试剂中以红色的甲苯胺红颗粒代替黑色的炭粉颗粒，使结果更易于观察 ;非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷 1、特异性：在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应 2、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，因此非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒的漏检率较高。RPR或TRUST有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的“钩状效应”，1~2％的二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。此外，晚期梅毒反应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量的漏检 非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点 1、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗 2、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标 3、此类方法价格低廉;测定非梅毒螺旋体抗原血清试验的滴度进行