梅毒的实验诊断教程教案.ppt

上述方法的优点是不须显微镜，肉眼就能观察，直观性强；操作简单，出结果快，特别适合普查和婚检。其敏感性在梅毒病程的早期阶段，各种血清反应中以RPR或TRUST最为敏感。 有文献称：RPR对初期梅毒病灶出现1-2周的阳性率为53~83%；二期梅毒的阳性率可达100%；晚期梅毒为58~85%，经药物治疗后血清学试验可转阴；胎传梅毒阳性率为80~100%。 其特异性为RPR或TRUST的滴度大于1:8时，要考虑有生物学真阳性和生物学假阳性的存在；前者主要见于与梅毒螺旋体同属的一些螺旋体感染，如品他，雅司螺旋体等；后者主要见于一些急性发热性疾病和自身免疫性疾病，如风疹，麻疹，传染性单核细胞增多症，上呼吸道感染，活动性肺结核，亚急性细菌性心内膜炎，红斑狼疮，麻醉及海洛因成瘾者。另外妊娠及0.4%的孕妇也可造成。 梅毒的实验诊断及其方法学评价 梅毒的诊断必须依据病史，临床体征，实验室的检查综合分析。近年来随着性病病例的上升，以及梅毒皮疹的多样性和潜伏梅毒的存在，实验室诊断已显示其重要作用。 梅毒的实验室诊断一般包括三个方面： 1、从病灶取材检查梅毒螺旋体。 2、从血清中检查侵入机体后所产生的相应抗体。 3、从病理组织切片上观察其病理特征的改变和（或）查见梅毒螺旋旋体。 一、检查梅毒螺旋体抗原： 1、方法：检查梅毒螺旋体抗原是对于早期疑似梅毒感染者，在体内还没有出现相应抗体前，取病灶分泌物进行涂片检查。常见的方法有显微镜暗视野检查法；Fontana-Tribondean镀银染色法；姬姆萨Giemsa染色法；浓盐酸蒸汽显示法；单克隆免疫荧光法（DFI）；聚合酶链检测法（PCR）。 2、方法及其评价：上述方法各有其特点，若镜检到梅毒螺旋体，在临床上可诊断为梅毒。具有快速，方便，易操作等特点。 显微暗视野检查法 本法已被世界卫生组织（WHO）指定为性病实验室必备项目之一。它是利用暗视野显微镜或荧光显微镜的暗视野装置进行检查；亦可用普通显微镜加装暗视野聚光器，若没有专门的聚光器，也可加装黑色的X光片包装纸，用剪刀剪成直径小于普通显微镜聚光镜直径，大约（0.8~1）CM，用少许镜油轻轻粘附于聚光镜头上，使光源之光线能从其周围透过即可进行应用。 螺旋体在暗视野下呈白色，折光性较强，反差明显，形态如多个“S”字母相连，清晰可辩，在用温盐水制片时还可观察其运动。低倍镜下看到螺旋体运动活泼，呈现不停翻动的闪光白点，高倍镜下见到其似多个连接的S状形态及运动形式多呈蛇行运动。 本法的缺点是与雅司螺旋体在形态上和运动方式上较难区别；与口腔及生殖器内的一些条件致病性螺旋体也难区分。若患者取材前1~2天已用抗菌素治疗，在病损处外用一些药物，如碘酊，乙醇，其他化学药物，可使其消失或形态发生改变，很可能见不到螺旋体。同时还应注意从口腔，咽喉及外阴部取材时有非致病性螺旋体的存在。 镀银染色法对于组织来讲有LEVOADITIS法和WARTHIN-STARRY法，在镜下螺旋体呈棕黑色而背景呈淡棕色，在组织切片中可见梅毒螺旋体的数量。本法试剂须现配现用，且配制较繁琐和一定的污染性，敏感性也较差。 浓盐酸蒸汽显示法是用1%刚果红和37%浓盐酸，梅毒螺旋体被染成蓝色，好处是操作简单，试剂用量少，成本低，易于观察；缺点是显色时程度不易掌握，浓盐酸易烧伤皮肤。 免疫荧光染色法 （DFI-TP） 原理是使用荧光标记的抗梅毒螺旋体单克隆抗体或多克隆抗体，检测患者组织液中梅毒螺旋体。 其方法有直接法和间接法；直接法是将患者组织液标本涂片，片膜直径小于1 cm，使其自然干燥，丙酮固10分钟，用已知抗梅毒螺旋体血清（一般用人或兔）经非致病螺旋体培养物吸收后再用异硫氰酸盐荧光素（FITC）标记，直接覆盖于标本上，经37摄氏度孵育30分钟彻底清洗，缓冲甘油封片镜检。 间接法是把已经吸收处理好的已知抗梅毒螺旋体血清加在固定好的标本上，37摄氏度孵育30分钟彻底清洗，再加FITC标记的抗体（人或兔），孵育，彻底清洗，用缓冲甘油封片固定镜检；结果在荧光显微镜下可见呈现亮绿色螺旋体，以见到完整的螺旋体为阳性。 最大优点是敏感性高，特异性强。因必须用荧光显微镜，加之荧光强度的观察以及某些有荧光淬灭作用物质如苯胺，酚，间苯二酚，硝基苯，卤化物的干扰，须避免此类物质污染，有鉴于此，难于在基层实验室推广。 PCR法 PCR法:在性病学研究领域中应用得较多，在临床上现国内暂停应用。PCR法是聚合酶链式反应的简称，其基本方法主要是两大步，一是引物的设计，二是循环扩增。 PCR法的最大特点是特异性和敏感性都非常高，有作者提出特异性和敏感性均优于血