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第三章 食用菌制种 本章要求学生重点掌握菌种、制种的概念；掌握菌种的类型和制种的工艺流程；明确制种所需的设备和重点掌握食用菌一级、二级和三级菌种培养基的制备过程要求学生重点掌握灭菌、消毒的概念和区别，高压湿热灭菌、常压灭菌的方法；掌握常用的物理化学消毒方法；了解干热灭菌的原理方法。要求学生重点掌握菌种的扩大方法和培养方法；掌握菌种分离中常用的组织分离法的操作过程；理解菌种的保存原理及常用保存方法。 1、掌握菌种、制种的概念2、掌握菌种的类型和制种的工艺流程3、重点掌握灭菌、消毒的概念和区别，高压湿热灭菌、常压灭菌的方法；掌握常用的物理化学消毒方法 4重点掌握菌种的扩大方法和培养方法 5菌种分离中常用的组织分离法的操作过程 12学时 实验课 12学时 授课方式：多媒体 第一节 制种设备 试管有多种规格，常用的是21mm×200mm、25mm×200mm。 菌种瓶一般容量是750ml、口径3cm的玻璃瓶，也有用罐头瓶、广口瓶生产的。效果以前种规格为好。但均要求能耐高温、高压，并要无色透明，便于检查菌丝生长和杂菌污染情况。 生产菌种的塑料袋要求用聚丙烯薄膜袋，常用的规格是17cm×34cm。塑料颈圈高3cm，直径3.5cm。用橡皮筋或塑料绳扎口。 药物天平、托盘式天平，称量1000g，感量-1.0g；扭力天平，称量100g，感量0.01g；分析天平，称量100g，感量0.1—1.0g。可根据不同要求选用。 孢子收集器是用来采收菌类孢子的一种装置，包括底盘、培养皿、三角架、纱布及有孔灯罩或钟罩等。 拌料设备主要有拌料机、铁铲等。 装料设备主要有装料机、铁铲等。 二、灭菌设备接种设备、培养设备、第 菌种培养基的制作一级种培养基的制备 　　按配方组成配制分装于试管里、管口塞棉塞。及时灭菌，灭菌时间不能太长，一般以30分钟即可，以免消毒时间过长会破坏培养料的营养成分，不利于菌丝生长。 　　消毒结束后立即取出试管斜放于桌面上，做成斜面培养基。挑取2-3支试管放置于250C恒温箱中培养3-5天，若培养基表面没有发现杂菌以及乳白色细菌产生，则表示灭菌彻底，可供扩接母种使用。 二、二级种三级种培养基的制备第 灭菌与消毒 干热灭菌 二、湿热灭菌 利用高温高压蒸汽灭菌，是一种最有效、使用最广泛的灭菌方法。蒸汽压力与温度成正比。高压灭菌所采用的蒸汽压力与时间，应根据具体物质而定。 高压灭菌锅的形成与规格较多，有立式、卧式、手提式，能源用电、蒸汽、煤等。 使用高压蒸汽灭菌锅应注意以下几点： ①灭菌锅内的冷空气必须排尽；②灭菌锅内的基质排列一定要稀疏些。使蒸汽流运畅通；③灭菌时升压和降压要缓慢；④灭菌过程应注意保持棉塞干燥。 2、常压蒸汽灭菌法 这是利用自然压力的蒸汽灭菌的方法。可用土蒸锅，蒸茏等灭菌。由于常压，温度较高压的低得多，故灭菌时间要长。其优点是结构简单、成本低、便于自制，适宜于家庭制种。 三、消毒①重金属盐类：所有的重金属盐类对微生物都有素害作用，如硝酸银、氯化汞等。 ②氧化剂：常用的氧化剂有高锰酸钾、过氧化氢、漂白粉、漂白精等，常用的高锰酸钾溶液浓度是0.1%，氯气自来水清洁剂浓度为1ppm，漂白精浓度为400ppm。 ③、有机化合物：甲醛（福尔马林）5%甲醛溶液用于种子表面消毒，原液可用于接种箱、培养室、栽培室等空间消毒，熏蒸用量6—10ml/cm3。 新洁尔灭：0.25%新洁尔灭溶液可用作皮肤、种子消毒。 4、干燥消毒 利用干燥使微生物失水，达到杀菌或抑菌的目的，称为干燥消毒。食物、药品等经过适当干燥，便可长时间保存，蘑菇干片即是。 5、渗透压消毒 利用高渗透压杀菌或抑菌的方法称渗透压消毒。在高渗溶液中，微生物细胞由于脱水，质壁分离，不能正常进行新陈代谢而死亡，盐水蘑菇就是利用这一原理制成。 第 菌种的分离、培养 一 菌种的分离1、子实体组织分离 ①、种菇的选择 从优良的品系中选取优良的个体作种菇，以单生菇、菇形圆整、无病虫害菇作分离材料。 ②分离 把种菇带入接种箱内，用75%酒精表面消毒，用解剖刀在菌柄中部纵切一刀，然后撕开，挑取菌盖与菌柄交界处的一小块组织，接种到PDA培养基上，数天后就可看到组织块及培养基上有白色菌丝，即表明分离成功。 2、菌核组织分离 茯苓、猪苓、雷丸等药用菌，常利用菌核分离得到菌种。分离方法是将菌核表面消毒后，用解剖刀切开，取中间组织1小块，接入PDA培养基上，20℃—25℃培养。 3、菌索分离 密环菌，假密环菌常用菌索来分离。方法是将菌索表面消毒后，去掉菌鞘，把白色菌髓部分用无菌剪刀剪成小段。移接在PDA培养基上，20℃—25℃培养，有白色菌丝长出且无污染，即表明分离成功。 （二）孢子分离法 孢子分离法是利用菌类的成熟孢子能自动弹射的原理，在无菌操作条件下