WB过程及注意事项.doc

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Quantity One定量+WB实战指南共有 19 人关注过本贴 样品制备: 变性条件——SDS LB直接裂解: 用常温或者高温预热过(预热更有利于阻止蛋白水解或者磷酸酶去磷酸化,但容易遗忘,LB久煮某些性质会改变)的1*SDSLB(或者略高1.5*)直接加到细胞或者组织上并煮样。通常6孔板细胞80%以上密度,需200ul,其他按平板面积比类推。通常条件下,SDSLB都是过量的(因此不一定要严格参考SDS LB稀释比);如果SDSLB不够,样品核酸、蛋白浓度过高时,煮样后会发现tip吸不上来,非常粘、一砣一砣的,很容易堵住tip。这时候常规做法有两种,1.再煮5min。常规煮样时间3-

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