β1整合素在鼠切牙颈环上皮细胞中表达.docVIP

β1整合素在鼠切牙颈环上皮细胞中的表达 　　【摘要】目的: 观察β1整合素在鼠切牙颈环上皮细胞中的表达情况及意义。方法:体外分离、培养和纯化鼠切牙颈环上皮细胞,以β1整合素多克隆抗体为一抗,进行免疫组织化学染色。结果:颈环上皮细胞呈多角形,克隆状生长,免疫组织化学染色发现β1整合素在鼠切牙颈环上皮细胞中呈阳性表达。结论:鼠切牙颈环上皮细胞中富含干细胞,β1整合素可作为颈环上皮干细胞的标记物。 　　【关键词】颈环;上皮细胞;细胞培养;β1整合素 　　【中图分类号】R392.3 【文献标识码】B 【文章编号】1008-6455(2010)08-0119-02 　　The expression of integrin-β1 in cervical-loop epithelial cellsof Wistar rat lower incisors 　　Xie Longchuan Hu Xiaoli Zhang Wenfeng Leng Weidong Luo Zhixiao 　　【Abstract】Objective:To observe the expression of β1-integrin in cervical-loop epithelial cells in Wistar rat lower incisorsand its meaning.Methods:The cervical-loop tissues were cultured in viro and purified.The purified cells were then identified by immunohistochemi-stry staining.Results:The cervical-loop epithelial cells are poly-angle and clone formation.The cervical-loop epithelial cells exhibit positive expression for integrin-β1 in immunohistochemistry staining.Conclusion:The cervical-loop epithelial cells are riching in stem cells in rat lower incisors.Integrin-β1 can be a marker of tooth epithelial stem cells. 　　【Key words】cervical-loop;epithelial cell;cell culture;integrin-β1 　　 　　整合素β1(β1-integfin)主要使干细胞与其周围的细胞外基质黏附维持其自身的稳定性。它与其配体相互作用可以为干细胞的分化、增殖提供适当的微环境并控制干细胞的增殖和分化,因此它是上皮干细胞研究常用的标记物之一。上皮干细胞具有通过整合素(integrin)与基膜黏附的特性,整合素表达降低表明该干细胞脱离该干细胞群并进入了分化。整合素可以定位追踪干细胞。而标记物的确立对于上皮干细胞的分离、鉴定及功能特性的研究有重要意义。目前关于integrin-β1 在鼠下切牙齿颈环结构发育中的表达情况还没有系统的报道。本实验通过对大鼠下切牙颈环上皮细胞中integrin-β1的表达研究来探讨其意义。 　　1 材料和方法 　　1.1 主要试剂和仪器:DMEM-F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶(均购置于Gibco,美国)。BCM型生物洁净台(北京),HH.B1.1-420BS型电热恒温培养箱(日本),SZX研究型体视显微镜(日本),OLYMPUSCX71显微镜及数码成像系统(日本)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 胰酶-葡萄糖-庆大霉素(trypsin-glucose-gentamicin,TGG)细胞消化液的配制[1] 以PBS液100ml溶解0.1g葡萄糖及0.25g胰蛋白酶,经0.2μm滤膜过滤后,加入0.5μg/ ml庆大霉素,置-20℃冻存待用。用前与已灭菌的0.02 %EDTA(PBS液溶解)按1∶1比例混合。 　　1.2.2 鼠尾胶原制备:从大鼠根部剪断大鼠鼠尾,自来水、蒸馏水清洗后,放入75%乙醇中浸泡30 min,在超净工作台中将鼠尾切成1.5cm小段,剥去鼠尾皮毛,抽出尾腱,置于玻璃皿中。用眼科剪剪碎肌腱,转移入0.1%醋酸溶液中,密封,置4℃冰箱,并不时摇动。48h后移入灭菌的离心管中,以4000r/min,30 min离心,无菌条件下吸取上清液,-20℃冰箱中冻存。应用时用玻璃吸管将解冻的鼠尾胶原均匀涂布于培养皿底部,37℃孵箱过夜,用灭菌D-ha