临床PCR实验室设计及质量管理体系建立.ppt

临床PCR实验室的设计及质量管理体系的建立 广西壮族自治区人民医院检验科 覃桂芳 质量体系文件的三大特性 唯一性: （1）一个实验室只能有一个质量体系文件系统; （2）一项检验活动只能有唯一的操作程序； （3）一项规定只能有唯一的理解，不产生歧义; （4）只能使用文件的有效版本，无效版本在实验室的任何地方都不能使用。 质量体系文件的三大特性 适用性:是指质量体系文件无统一格式；无标准文 本；怎么做怎么写，切合实际，具有可操作性，不 拘一格。所有文件的规定均应保证在临床实际检测 工作中能完全做到。当发现文件有不适合情况时， 则应立即按规定程序对文件进行修改。 实验室清洁SOP要点 按实验室台面、地面和仪器设备分开来 写各自的具体清洁方法，要具体而又有可 操作性 应规定工作人员在清洁时，必须按 试剂准备区?标本制备区?扩增(及产物分 析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区 域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得 混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出 时的消毒清洁方法 临床标本的采集、运送、接收和保存 SOP 明确标本从采集处运送至实验室过程中所要求的运送条件 明确标本接收时，签收的程序、拒收的标准和标本唯一编号的规则 规定标本在实验室内的短期（应有具体时间）和长期（应有具体时间）保存条件和要求 制定保证标本安全，即如何防止标本丢失、掉换、变质的措施 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 临床标本的采集、运送、接收和保存 SOP 特定标本采集的具体方法步骤 明确规定标本的采集容器要求 明确标本的采集量 明确标本采集后送到实验室检测所能容许的最大时间间隔，亦即标本采集后，应在多长时间内送至实验室 明确标本采集后，在送至实验室检测前的保存方式和条件 试剂和消耗品的质检 SOP 试剂质检的基本方面，如试剂的抗干扰能力（主要是针对提取试剂），即对溶血、脂血标本扩增抑制作用的了解。可通过自行制备含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的标本进行质检。如为定量检测试剂，还应包括检测的重复性、线性范围等的质检，通常使用2-3份样本进行检测即可。如为定性检测试剂，则应重点考察测定下限，可用系列稀释的含已知量靶核酸的血清标本进行 核酸提取用离心管质检的基本方面 带滤心吸头的质检主要是滤芯的密封性 项目检测、结果判断、解释和报告 SOP 标本进入实验程序后的操作编号方式 根据所用试剂盒确定的详细操作流程 仪器编程及文件名的编写规则 结果判读的流程和规则 结果分析解释的流程 结果报告流程 实验记录及其管理 SOP 日常检验过程中应记录的基本内容的规定，如仪器设备操作、维护和校准过程及有关数据；检验试剂来源和批号；检验标本的来源和唯一编号；试剂的配制；实验环境条件的控制记录；实验室清洁的记录；质控的记录；原始检测数据及其推导记录等 对实验记录者的签名方式的规定和要求 实验记录管理的基本方面：指定专门的管理人；有专门的保存处如柜子等；记录的登记归档方法；记录的借阅及销毁记录；记录保存的时间；电子记录的备份保存具体方法及保存时间等 室内质量控制 SOP 明确室内质控物（阳性和阴性）的来源及浓度 明确所选用的质控方法 明确失控的判断标准或所采用的失控规则 明确失控后的分析及处理措施 阳性质控样本测定结果偏低或为阴性 结果偏低 阴性 临床标本中无强阳性 临床标本中有较强阳性 临床标本中有阳性 临床标本全为阴性 观察临床标本情况 所用离心管含抑制物 Taq酶活性降低 核酸提取试剂效率低 更换进口离心管 更换Taq酶再检测 更换核酸提取试剂 所有标本重新检测 核酸提取中靶核酸丢失 核酸提取中抑 抑物残留 核酸提取试剂混入 扩增仪孔间温度差异 随机误差 检测质控样本及3~5份已知阳性样本 质控样本测定正常且阳性样本有些值增加 质控及已知阳性样本测定仍异常 按系统误差途径分析 重新提取或已知浓度DNA在同一孔内扩增 结果正常 结果仍低 进行扩增仪孔温度校准后再检测 Taq酶或逆转录酶失活 阴性质控样本测定为阳性 临床标本亦全为阳性 临床标本中有阳性也有阴性 扩增产物“污染” 试剂“污染” 同时检测的标本情况 扩增产物轻度“污染” 标本间交叉“污染” 3~5空管室内静置 5~8份水样本检测 试剂直接扩增检测 验证 验证 5~8份水样本检测 暂停日常检验，实验室清洁、通风 更换试剂 措施 有阳性，则确认有实验室“污染” 无阳性，说明为标本交叉“污染” 改善操作 措施 参加室间质量评价 SOP 明确规定室间质评样本的接收记录方式、保存条件及实验编号规则 明确室间质评样本的