单克隆抗体相关内容讲解课件.pptx

有梦想，才会有创造！ 生物种间杂交想像图 已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡 、人—胡萝卜 等细胞的融合。主 要 内 容一、植物细胞杂交过程 二、动物细胞融合 三、多克隆抗体 四、单克隆抗体 1.单克隆抗体的制备 2.单克隆抗体的优缺点 3.单克隆抗体的应用植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合再生出细胞壁脱分化再分化一、植物体细胞杂交过程纤维素酶、果胶酶杂合的原生质体杂种细胞愈伤组织杂种植株 1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？人-鼠(想像图)二、动物细胞融合1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也成细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。2、原理：细胞膜的流动性 两个细胞正在融合 受精作用有些细胞的融合是正常的生命活动，如精子与卵细胞的结合。物理方法：离心、振动、电激等3.诱导方法：化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒4.融合过程 为什么灭活的病毒能作诱导剂？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？为什么灭活的病毒能作为诱导剂？不灭活的病毒能作为诱导剂吗？生物法：灭活的病毒丧失感染性紫外线（不感染细胞）仙台病毒保留融合活性两个核的融合是在杂种细胞第一次有丝分裂时进行的4.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。5.应用：最重要的用途是制备单克隆抗体获得杂种植株制备单克隆抗体植物细胞杂交与动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理使用的酶诱导方法主要用途细胞膜的流动性 细胞的全能性细胞膜的流动性使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合纤维素酶、果胶酶胰蛋白酶 物理方法（离心、振荡、电激） 化学方法（PEG）物理、化学方法 灭活的病毒三、多克隆抗体定义： 采用传统的免疫方法，将抗原物质经不同途径注入动物体内，经数次免疫后采取动物血液，分离血清，所获得的抗体即为多克隆抗体。 无论是细菌抗原，还是病毒抗原，均由多种抗原成分组成，因此进入机体后可激活多种淋巴细胞克隆，机体可产生针对各种抗原成分或抗原决定簇的抗体，由此获得的抗体实际是一种多克隆的混合抗体。思考？四、单克隆抗体什么叫克隆？2.什么叫抗体？抗体由何种细胞产 生？如何产生？3.抗体的化学本质是什么？ 与抗原作用的特点？ 主要分布在哪里？4.用传统的方法如何获得抗体？抗体的传统生产方法从血清中分离抗体多种效应B细胞多种抗体动物体内抗原 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。1.单克隆抗体的制备　那么，如何大量获得化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）　 单克隆抗体McAb（概念） 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 单克隆抗体制备技术发展1975 年德国科学家Kohler 和英国科学家Milstein利用杂交瘤技术将产生抗体的B 淋巴细胞同骨髓瘤细胞融合，成功的建立了单克隆抗体制备技术，由于单克隆抗体在生命科学领域的巨大贡献，此技术获得1984 年的诺贝尔医学和生理学奖。1994年Winter 等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步， 该技术是按人工设计所重新组装的新型抗体分子，使不经免疫既可获得任何一种动物（包括人）的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。单克隆抗体技术的基本原理小鼠受到外界抗原刺激后可诱发免疫反应，产生相应的抗体，这一职能是由B 淋巴细胞来承担的；肿瘤细胞在体外培养的条件下可以无限传代，是“永久”的细胞。把小鼠的骨髓瘤细胞与经免疫过的小鼠的脾细胞在聚乙二醇等介导下发生融合，融合后的杂交瘤细胞具有两种亲本细胞的特性，一方面可以分泌特定的抗体,另一方面也具备了肿瘤细胞无限增殖的能力, 可在体外培养条件下或移植到体内无限增殖, 从而分泌大量单克隆抗体。设计方案一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖动物细胞培养技术动物细胞融合单克隆抗体杂种细胞既能产生特异性抗体，又能大量繁殖过程 注射抗原筛选，继续培养体外培养能产生抗体的杂交瘤细胞细胞培养注射到小鼠腹腔B瘤B瘤B瘤B瘤B瘤B瘤BBB瘤瘤B瘤B瘤B淋巴细胞骨髓瘤细胞瘤诱导其融合的方法有哪些？选择性培养基细胞融合、筛选选择性培养基作用：使亲本细胞和具有同种核的杂交细胞不能存活而杂