慢性子宫颈炎患者子宫颈人乳头状瘤病毒、单纯疱疹病毒和沙眼衣原体的检测.doc

慢性子宫颈炎患者子宫颈人乳头状瘤病毒、单纯疱疹病毒和沙眼衣原体的检测 中华妇产科杂志 1999年第11期第34卷 论著摘要 作者：包其郁　 张丽芳　 朱雪琼 　王玉环 单位：包其郁，张丽芳　325003 温州医学院微生物学教研室；朱雪琼，王玉环　附属第二医院妇产科 　　人乳头状瘤病毒（HPV）、单纯疱疹病毒（HSV）和沙眼衣原体（CT）是引起性传播疾病（STD）的主要病原体，且与宫颈疾病，尤其是宫颈癌的发生相关。我们应用聚合酶链反应（PCR）技术对在妇产科门诊就诊的慢性宫颈炎患者HPV、2型HSV（HSV-2）和CT的感染情况进行了检测。 　　一、 资料和方法 　　1. 研究对象：92例为1995年11月至1996年11月间就诊于温州医学院附属第二医院妇产科的慢性宫颈炎（伴不同程度宫颈糜烂）患者（观察组），年龄18～67岁，取其宫颈脱落细胞；并采集同期间在门诊体检，宫颈口外观正常、光滑、无炎症的育龄妇女宫颈脱落细胞标本48份为对照组。 　　2. 标本处理：脱落细胞标本用pH7.0、66 mmol/L磷酸盐缓冲液洗涤，离心后用蛋白酶K于55℃水浴作用3小时，再于95℃10分钟灭活蛋白酶K、收集离心后的上清液，-20℃冰箱保存备用。 　　3. HPV、HSV-2和CT测定：采用PCR方法。总HPV、HSV-2和CT检测试剂盒购自伊利康生物技术有限公司，各试剂用量及实验步骤按说明书进行。HPV亚型（6、11、16和18型）引物由澳大利亚Queensland 大学周健博士惠赠。试剂用量为每50 μl反应体系中，含各型引物50 μmol/L，4种脱氧三磷酸核苷各200 μmol/L，TaqDNA聚合酶1.5U，模板用量10 μl，反应步骤为92℃ 60秒变性、55℃ 120秒复性、72℃ 90秒引物延伸，共进行35个循环。每次设试剂空白管和已知阳性模板管对照，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，在紫外光下观察结果并照相记录。 　　4. 统计学方法：两组病原体检出率比较，采用χ2检验。 　　二、 结果 　　1. 两组HPV、HSV-2和CT的检测结果：观察组检出HPV、HSV-2和CT分别为43例（47%）、30例（33%）和22例（24%），对照组分别检出6例（13%）、4例（8%）和1例（2%）。两组间3种病原体的检出率差异均有极显著性（P＜0.01）。观察组病原体总检出率为74%（68/92），与对照组病原体总检出率（23%，11/48）比较，差异有极显著性（P＜0.01）；观察组2种或以上病原体检出率为24%（22/92），而对照组无多重病原体检出者；轻度、中度和重度宫颈糜烂者总病原体检出率分别为54%（15/28）、72%（21/29）和91%（32/35）（P＜0.01），随着宫颈糜烂程度的增加，多重病原体检出率也显著增高，见表1。 　　2. 观察组患者不同年龄者的3种病原体检测结果：各年龄段（18～25岁、26～35岁、36～45岁和46～67岁）病原体总检出率分别为96% （22/23）、74%（26/35）、64%（14/22）和50%（6/12），其中单一病原体检出率分别为70%（16/23）、46%（16/35）、41%（9/22）和42%（5/12），多重病原体检出率则分别为26%（6/23）、29%（10/35）、23%（5/22）和8%（1/12）。 各年龄段病原体总检出率差异有显著性（P＜0.05），以18～25岁者检出率最高。 　　3. HPV亚型分布： 43例检出一个或多个HPV亚型，16型和18型检出率较高，分别为56%（24/43）和40%（17/43），6型和11型的检出率分别为5%（2/43）和2%（1/43）；单独检出16型或18型28例（65%），同时检出16型和18型5例（12%）、6型和18型1例（2%），6、11和18型 1例（2%）。 　　三、讨论 　　本研究HSV-2及CT的检出率与国内的报道［1，2］接近，尚未见对该组患者上述3种病原体联合检测的报道。 　　HPV约有100多个亚型，6和11型主要引起生殖道尖锐湿疣 ，16和18型主要引起宫颈癌［3］。本资料中HPV16或（和）HPV18型阳性者占81%（35/43），说明与宫颈糜烂有关的HPV以16和18型为主，有潜在癌变危险。 表1　HPV、HSV-2和CT在不同程度宫颈糜烂患者（观察组）及对照组中的检出情况 组别总 　　例 　　数病原体 　　总检出检出单一病原体检出两种及以上病原体HPVHSV-2CTHPV+CTHPV+HSV-2CT+HSV-2HPV+HSV-2+CT例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)例数检出率 　　(%)