水蛭的抗早孕有效成分研究(Ⅰ).doc

水蛭的抗早孕有效成分研究(Ⅰ) 【关键词】 水蛭 摘 要 目的:探索水蛭抗早孕有效成分。方法:通过有机溶剂沉淀方法初步对水蛭水煎剂不同成分进行分离，经蛋白质定性实验、IR和薄层色谱鉴别，并对分离出的各成分进行小鼠抗早孕实验。结果:分离得到的成分(Ⅱ) 是一种活性蛋白质，有抗早孕活性。 结论:水蛭中的抗早孕有效成分是一种蛋白质。 关键词 水蛭；抗早孕；有效成分；蛋白质 Study on the effective constituents of antiearly pregnancy in Whitmina pigra YANG Jian,WANG Xian, HE yunjiao （Department of Pharmacy，The People Hospital of Wuhan University，Wuhan,Hubei 430060) Abstract Objective: To study the effective constituents of anti-early pregnancy in Whitminia pigra. Methods: The effective constituents in Whitminia pigra decoction were obtained through organic solvent precipitation and characterized by protein qualitative test,IR and TLC.Antiearly pregnancy experiments were conducted in rats. Results:Constituent (Ⅱ) obtained from Whitminia pigra decoction was an active protein with antiearly pregnancy activity. Conclusion: The effective constituent of antiearly pregnancy in Whitminia pigra is a kind of active protein. Key words Whitminia pigra;antiearly pregnancy;protein 水蛭是传统的中药，本草纲目记载其有破血、逐瘀、通经和堕胎作用。近年对水蛭破血、逐瘀、通经方面成分研究有较多报道［1］，水蛭素被认为是世界上最强的凝血酶抑制剂，其药效学、药代动力学、临床实验及毒副作用都进行了广泛的研究。目前国内水蛭成分研究还是空白，只有贾氏［2］等初步探讨过从活水蛭中提取抗凝血物质的方法，张氏［1］等对干水蛭进行了微量元素和氨基酸的分析［3］。水蛭水煎剂有较强的抗早孕作用，但至今其抗早孕作用的活性成分仍不清楚。本实验通过对水蛭水煎剂的化学成分进行分离，寻找其抗早孕的有效成分，对这一现象作出合理的解释，为开发新的抗早孕药物打下基础。 1 实验材料 1.1 药物 水蛭(购于刘有余药材公司,经鉴定为宽体金线蛭Whitminia pigra干燥全体),化学试剂均为分析纯。 1.2 仪器 SHZ-D（Ⅲ）型真空泵 (巩仪英峪予华仪器厂)；RE-52C型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；JBZ-14H型磁力搅拌器（上海大中分析仪器厂）。ＩＲ由武汉大学测试中心测定。 1.3 实验动物 30～35 g成熟未生育的SD小白鼠（武汉大学医学院动物实验中心提供）。 2 实验方法与结果 2.1 提取分离　称取干燥水蛭200 g，研成细粉，于烧杯中用蒸馏水400 mL煎煮30 min，纱布过滤，合并两次滤液，80 ℃浓缩为100 mL 溶液，离心，弃去沉淀。上清液放置过夜，次日再过滤，得滤液。向滤液中加等体积乙醇，有黑色粘稠沉淀（Ⅰ）析出，分离沉淀用50 mL蒸馏水溶解，抽滤。滤液再用适量乙醇沉淀，沉淀用蒸馏水反复冲洗，抽滤，真空干燥得黑色粉末（Ⅱ）2.4 g。上述滤液放置过夜，次日将上清液浓缩至20 mL，加入等体积丙酮，有淡黄色沉淀析出，抽滤，真空干燥得白色粉末0.76 g(Ⅲ)。丙酮沉淀后滤液放置过夜，倾出上清液，加入4倍丙酮，有棕色沉淀析出，抽滤，真空干燥得1.5 g（Ⅳ），滤液放置过夜，将上清液浓缩至50 mL溶液（Ⅴ）。 2.2 药理实验［3］ 2.2.1 抗早孕活性成分筛选　取体重30～35 g未生育的成熟小鼠，以雌雄2∶1合笼，每天上午做阴道检查。小鼠妊娠成期为20 d左右，1～5 d为着床期；6～9 d为妊娠早期；10～14 d为妊娠中期；15 d后为妊娠晚期。以发现阴栓为受孕第1 d。于受孕第6～9 d给药，ip，bid，共1 d。次日观察阴道出血情况，然后尾静脉注射