油茶随机扩增多态DNA条件的研究.pdf

维普资讯 第 30卷 第 2期 福 建 林 业 科 技 V01．30 No．2 2003年 6月 Jour ofFujian Forestry Sciand Teeh Jun．，2003 油茶随机扩增多态 DNA条件的研究 张 云 ，黄儒珠 ，刘大林 ，齐清琳 ，刘 国敏 ，叶 锋 (1．福建师范大学生物工程学院，福建 福州 350007；2．福建省林业厅， 福建 福州 350003；3．福建闽侯桐 口国有林场，福建 闽侯 350100) 摘要：以改进的CTAB法提取油茶嫩叶总DNA，进行随机扩增多态DNA(RAPD)分析，分别测试了Md 浓度、引物浓度、 dNTP浓度、模板DNA浓度和 TaqDNA聚合酶 用量对反应结果的影响，确定了油茶 RAPE)分析 的最适反应体 系：在 25v．IPCR反应体积中，含 20rig模板 DNA，2．5reotol·L—MgC12，0．2mmol·L～dNTP，0．3~／mol·L-1引物，1U TaqDNA聚合 酶。扩增程序为：94℃预变性 180s；94℃变性 60s，37C退火 90s，72C延伸 120s，反应 40个循环；最后在 72C延伸 5min。 关键词：油茶；随机扩增多态DNA；反应条件 中图分类号：$794．4 文献标识码：A 文章编号：1002—7351(2003)02—0005—04 StudyontheRandom AmplifiedPolymorphicDNAConditionofCamelliaoleifera ZHANG Yun ，HUANG RQ-zhu1LIU va-nn2 , ， QIQillg-lin2，LIUGuo-min3，YEFen83 (1．TheOiocngine~ingCollegeofFujiaaNormalUniversity，Fuzhou350007，China；2．FujianForestryDepartmmt， Fur．1mu350003，hC ina ；3．TongkouNationalForatFarmo，Minhou，Fujian，Minhou350100， ) Abstract：TheCamelliaolcifcrasuitablereactionsystemanalys硝 byRAPDwasdeterminedasofUowa：25 ofPCRreactionvol— m econtainde 20ngoftme plateDNA，2．5mmol·L～ ofMgClz，0．2mmol·L～ ofdNTP，0．3／anol·L～ ofprimer，na d1U ofTaq DNA yTn啪 se．Theaugraenatfionprocedurewas ：pre-denaturationat94C ofr180s；denaturationat94℃ ofr60s；annealingat 37C for90s；extensionat72(3ofr120s，raectionof40cycles；nadextensionat72(3for5minutes atlast． Keywords：Camelliaoldfera；rnadom amplifide polymorphicDNA；raectionocndition 随机扩增多态DNA(RandomAmplifiedPolymorphicDNA)是90年代 由J．G．Williams[】和J．welsht] 等建立起来的一种独特的检测DNA多态性的技术，由于其具有覆盖信息量几乎是无限的以及实验操作 快速、高效等优点，在短短的十几年 内被广泛应用于分类学、物种亲缘关系、品种识别、特定性状分子标记 以及基因定位、遗传图谱构建等各个方面的研究。RAPD分析最适的扩增条件在不同的研究中存在一定 差异，这就要求对反应条件进行优化，建立稳定可靠的反应体系，以确保能获得重复性高的实验结果。油 茶是我国四大木本油料树种之一，栽培历史