全丝胶蚕品种丝胶蛋白酶抗氧化能力.docVIP

全丝胶蚕品种丝胶蛋白酶的抗氧化能力 　　摘要：本文比较了全丝胶品种蚕茧热水溶解的全天然丝胶蛋白质与其他非全丝胶品种蚕茧的丝胶蛋白质及其丝胶蛋白酶的抗氧能力。结果表明，丝胶蛋白本身没有抗氧化能力，不同品种的丝胶蛋白酶的抗氧化能力则各不相同，去除羟基自由基和去超氧自由基的能力，全天然黄绿丝＞全天然白丝＞菁松皓月＞远缘杂交黄丝＞远缘杂交白丝。 　　关键词：全丝胶蚕品种　丝胶蛋白酶　抗氧化能力 　　 　　前言： 　　人类生存的环境中充斥着不计其数的自由基，我们无时无刻不暴露在自由基的包围和攻击中。炒菜油烟产生大量自由基，吸烟能最直接产生自由基。汽车尾气、工业生产废气等环境污染产生的大量废气产生大量自由基。另外，人体自身新陈代谢过程中由于氧化反应也会产生自由基。 　　自由基对人体攻击的途径是多方面的，既有来自体内的，也有来自外界的，自由基对人体的攻击，既在最深层引起突变，又在最表层留下痕迹。自由基引发氧化作用，人体体外发生氧化，光和空气容易产生活性氧化酶和促进酪氨酸活性化活性，使皮肤发皱、产生斑点、变黑老化、引发皮肤癌变的可能。人体皮肤体内发生氧化，由于活性氧化酶作用，会引起精神紧张、心累、苦痛、寒冷、感染等极其普遍的刺激，而产生生体机能的变化，与癌、动脉硬化、糖尿病等具有密切关系。人类的食品发生氧化，人体本身是产生活性氧化酶和促进酪氨酸活性化活性的好适环境，食品的氧化是酶的褐变和黑色素的积累过程，使食品变质，营养破坏，导致一系列的食品制造、安全保鲜、营养吸收等恶劣后果。各种自由基所引发的氧化作用，是导致身体中各组织和器官损伤、病变的重要原因之一。人的衰老、动脉硬化、心脏病、肿瘤、肾病、肝病、糖尿病、白内障等近百种疾病的发生和发展均与自由基所引发氧化有关。 　　蛋白质抗氧化能力的大小在于去除自由基的能力。因此，降低自由基危害极为重要。降低自由基危害的途径也有两条：一是利用内源性自由基清除系统清除体内多余自由基；二是发掘外源性抗氧化剂――自由基清除剂，阻断自由基对人体的入侵。 　　不同分子量范围的丝胶蛋白酶具有较强的自由基清除清除作用，非常适合于化妆品护肤品、医药保健品等领域的应用。然而，现行利用的丝胶基本上都是从生丝加工时排出的精炼液中回收的，或是从茧壳中用碱水和热水溶出。回收提取的丝胶蛋白容易变性，而且易混入分解物，透析、精制的工艺复杂，生产成本高。 　　日本在世界上首次育成了家蚕丝胶品种，丝胶含量达到98.5％。是直接用于各种丝胶高级化妆、保健等产品的优良材料。本研究组利用日本引进的丝胶品种资源和自主创新品种资源，采用远缘杂交、基因导入、定向选育等方法，育成“绿s”和“白s”两个丝胶特殊蚕品种，全天然丝胶蛋白含量达97％以上。本文在利用丝胶特殊蚕品种大量生产优质的全天然纯丝胶蛋白质的基础上，探讨丝胶品种生产的全天然丝胶蛋白质及其丝胶蛋白酶的抗氧化能力。 　　 　　一、材料与方法 　　 　　1　材料 　　1.1　蚕茧品种 　　绿S　全天然黄绿色丝胶品种 　　白S　全天然白丝胶品种 　　YZ01　远缘杂交黄绿色普通品种 　　YZ02　远缘杂交白色普通品种 　　JS　菁松皓月现行普通品种 　　均由安徽省农业科学院蚕桑研究所提供。 　　 　　2　实验方法 　　2.1　丝胶溶解 　　称量供试品种蚕茧各5g，用温水洗涤去掉赃物，剪成碎片，加入用氢氧化钠调PH至10.5的溶液250ml，浸泡一小时，加入10g碳酸钠/100ml，放入灭菌锅在125℃煮2.5h，用纱布过滤，生丝用温水洗涤三遍，合并蚕丝脱胶液和洗涤液，然后滤纸抽滤，获得丝胶溶液。 　　2.2　丝胶溶液浓缩 　　丝胶溶液在80℃旋转蒸发至约200ml，浓缩液加入400m195％的乙醇，摇匀，在6000r/min分离心10min，弃去上清，留下沉淀。 　　2.3　冷冻真空干燥 　　分别在试管中加入20ml丝胶浓缩液置于离心管中，往其中慢慢滴入0.1mol/l的盐酸溶液，至溶液中有浑浊，放入在冷冻真空干燥仪在样品温度-33℃，压强1帕斯卡条件下干燥。 　　 　　3　丝胶蛋白酶解物的抗氧化性 　　3.1　抗氧化性实验原理 　　清除羟基自由基：双氧水在亚铁离子的催化下会反应生成羟基自由基，生成羟基自由基过程中，536nm和510nm处有光吸收的中间产物，当加入超氧自由基清除剂时，能迅速与超氧自由基反应，阻止中间产物的积累，致使溶液在320nm处吸收减弱，以水杨酸乙醇溶液作为捕捉剂，生成紫色，在波长510nm和536nm检测吸光度来评价清除剂对羟基自由基的清除作用。 　　清除超氧自由基(-O2-)：采用邻苯三酚自氧化法产生超氧自由基，邻苯三酚在pH＞7.9后迅速自氧化。自氧化过程中形成一系列320nm处有光吸收的中间产物，当加入