环境工程微生物学实验指导112修改1.doc

环境工程微生物学实验指导 西北师大地环学院环境科学与工程系 巨天珍教授 环境工程微生物学实验指导书 授课对象：环境科学专业 课程类型：必修 学时数： 36学时 学分数： 2 先修课程：环境工程，水污染控制工程。 基本要求： 课前预习 了解清楚实验的目的、原理和试验内容，需测试项目的测试方法，实验中应注意的问题并于实验前提交预习报告。 实验操作 实验前要熟悉实验设备，了解操作要点，实验中严格按操作要求认真操作，仔细观察实验现象，精心测定和详细记录实验数据。 实验数据整理 通过实验取得大量数据后，必须对数据进行科学地分析整理，去伪存真，去粗存精，以得到正确、可靠的结果。（这一部分往往被忽视，应重视对实验结果的分析，引导学生查阅文献，进一步验证实验过程的可靠性，激发学生对未知规律探索的兴趣） 实验项目总表 实验项目名称 项目类别 项目类型 项目学时数 培养基的制备及灭菌 基础性 必做 2 微生物形态观察 （菌落特征的观察） 基础性 必做 4 细菌的简单染色 基础性 必做 4 革兰氏染色法 基础性 必做 4 土壤微生物的检测 综合性 必做 8 水质的细菌学检测 设计性 必做 4 空气微生物的检测 设计性 选做 4 植物基因组DNA的小量提取方法 综合性 必做 2 聚合酶链式反应（PCR） 综合性 必做 2 DNA琼脂糖凝胶电泳 综合性 必做 4 实时荧光定量PCR的使用 综合性 必做 2 目 录 实验须知 1 实验1 培养基的制备与灭菌 2 实验2 微生物的形态观察 4 实验3 细菌的简单染色 6 实验4 革兰氏染色法 9 实验5 土壤微生物的检测 11 实验6 水质的细菌学检测 16 ＊实验7 空气微生物的检测 20 实验8 植物基因组DNA的小量提取方法 22 实验9 聚合酶链式反应（PCR） 24 实验10 DNA琼脂糖凝胶电泳 26 实验11 实时荧光定量PCR的使用 28 参考文献 29 附录1 常用玻璃器皿的洗涤与包扎 30 附录2 普通光学显微镜的使用 34 附录3 相差显微镜 38 附录4 菌种的保藏 40 附录5 培养基配方 42 附录6 几种主要染色液的配制 44 附录7 常用试剂、溶液的配制 45 实验须知 普通微生物学实验课的目的是：训练学生掌握微生物学最基本的操作技能；了解微生物学的基本知识；加深理解课堂讲授的某些微生物理论。同时，通过实验，培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力；养成事实求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 在微生物学实验过程中，学生和老师会经常接触水电、病原微生物以及其他危险品。为了保证安全，规范操作，勤俭节约，特提出如下注意事项。 1.实验前的准备 （1）为了保证实验室的整洁和实验顺利进行，非必要的物品包括书包，请勿带入室内。 （2）准备好实验工作服和必要的实验用具、留头发者须将头发扎起，做好必要的清洁工作。 （3）实验前必须预习实验内并做好预习报告，了解实验目的、原理和方法，做到心中有数，思路清晰。 （4）按实验要求准备好培养基、菌种和必要的试剂。 2．实验过程中的注意事项 （1）实验室内严禁饮食和吸烟。实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 （2）一切易燃品，如乙醇、乙醚、丙酮等，应远离火源，不可将酒精灯倾向另一酒精灯引火。电炉、煤气等用完后应立即关灭。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。 （3）实验小心仔细，操作严格谨慎，预防感染。用过的棉球、纱布等污物，放在固定容器中，统一处理，不得随意抛弃。如不慎将菌液洒到桌面或地面，应以5%石碳酸溶液或3%来苏尔溶液覆盖0.5小时才能擦去。如不慎将菌液吸入口中或皮肤破伤处或烫伤，应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐瞒。 （4）实验进行培养的材料，应注明组别、名称及处理方法，放于教师的地点进行培养。 （5）认真、及时做好实验记录，不可潦草应付。对于连续观察的实验，则需记下每次观察的时间、现象和结果。 （6）实验室中各物均应摆放一定位置，工作完后放回原处或指定地点。 （7）使用显微镜等仪器时，要求细心操作，按操作规程工作、保养，避免不必要的损耗和意外。金属器皿用完消毒后，应立即擦干，防治生锈。 （8）使用药品、试剂、染色剂、镜油、擦镜纸、玻璃器皿等消耗品要力求节约。 3．实验结束后的注意事项 （1）实验完毕后，必须把所有仪器擦净放妥，将实验室收拾整齐，擦净桌面，对有菌液污染的地方进行