由于药物抗癌的选择作用.doc

前 言 由于药物抗癌的选择作用、个体差异性、多重抗药性（原、继发性）等因素的影响，肿瘤个体对药物的敏感性和耐药性不同，即使是同一组织学类型，分化程度相同的肿瘤对同一药物的敏感性也不同。因此，选择和确定针对个体的化疗敏感药物，既可以减少化疗的盲目性，又可以避免不必要的机体损害和多重抗药性的产生，提高治疗效率。 本试剂盒是通过肿瘤细胞体外给药培养，经生物荧光系统(ATP-TCA)测定活细胞指标ATP，进而判断抗肿瘤药物的敏感性和抗性。具体而言，荧光酶在有氧条件下,可以和底物荧光素结合后催化ATP转变成AMP,并同时释放出荧光（波长为 562nm），测定所产生的荧光强度,可获得ATP的含量。再根据细胞内ATP含量与 细胞活性状态在一定范围内呈线性关系，通过对细胞内ATP含量(10-13～10-5mol/L)的测量可计算出活细胞数量。 由于采用了ATP生物荧光技术，以ATP含量作为测定细胞活性的指标，本试剂盒具有灵敏度高、特异性好、周期短、临床相关性好、可测性高等优点，并配有自动化的扫描设备、统计分析系统，检测分析方便、快捷。 本试剂盒注册号：国食药监械(试)字2005第3070035号 本试剂盒执行标准：YZB/国 0535-2003 医疗器械生产企业许可证：京药管械生产许号 本试剂盒主要用途及适用肿瘤类型： 1、体外筛选对肿瘤细胞敏感的化疗药物，为个案化治疗方案提供客观依据； 2、研究和确定新的化疗方案和治疗原则； 3、评估联合用药方案； 4、研究肿瘤耐药机制； 5、体外筛选新药； 6、适用肿瘤类型：卵巢癌。 试剂盒组成(可测定24种药物): 组织消化酶 ×2 瓶/冻干 ATP提取液 ×1瓶/25ml 96孔培养板×4 块 荧光酶-荧光素系统×2瓶/冻干 培养基 ×1 瓶/200ml ATP生成抑制剂 ×1瓶/10ml 红细胞裂解液 ×1瓶/25ml 荧光酶工作液 ×1瓶/25ml ATP标准 ×1瓶/冻干 说明书 1份 试剂盒中不包含的试剂和材料： 无菌0.15M PBS pH 7.2 10ml无菌移液管 标本浸泡液 RPMI 1640培养液（不含血清） 无菌试剂池 50ml无菌锥形塑料离心管 多道加样器(200ul) 无菌去离子水 无菌平皿 血细胞计数板 台盼兰溶液 细胞培养箱 荧光发光检测仪 操作步骤：（以下均为无菌操作） 1.1 标本的处理和运送: 1.1.1实体瘤标本的处理、运送 为了获得足够数量的活肿瘤细胞，要切取肿瘤细胞较多、未坏死液化的部分，标本不应小于1.0克。取出标本后应立即浸入装有PBS或RPM11640培养液的无菌小瓶中,并在最短时间内（3小时内）送抵实验室。标本置于标本浸泡液中浸泡15分钟。 标本浸泡液配方：400u/ml庆大霉素，500ug/ml氨苄青霉素，3ug/ml两性霉素，制霉菌素125u/ml,溶解于RPMI 1640培养液。 1.1.2胸腹水标本的处理、运送 因胸腹水中细胞数量多少不一，应尽量多收集标本，不少于500ml，按 20u/ml的浓度加入肝素抗凝。 1.2 肿瘤细胞悬液的制备: 1.2.1实体瘤 组织消化液配制：将10ml RPMI 1640培养液加入到组织消化酶冻干瓶中充分混合溶解，过滤除菌，置于50ml无菌塑料离心管中待用。 除去标本浸泡液,剥离肿瘤标本表面的结缔组织、纤维和脂肪，用无菌剪刀将标本剪碎成1mm3的碎块,然后将其转移至含组织消化液的离心管中。 将离心管倾斜置于37℃孵育箱中孵育1.5-3小时,每隔15-30分钟振摇一次,使其充分消化。 消化结束后用10ml吸管反复吹打消化混合液，使组织块完全分散。 洗涤细胞。加入35ml RPMI 1640培养液，混匀后400g离心10分钟，去上清。如有大量红细胞（25%），参考1.3去除。然后加入35ml RPMI 1640培养液混悬沉淀物，400g离心10分钟，去上清。加入3-5ml培养基混匀制备得细胞悬液。 细胞计数。吸取一定量的细胞悬液,适当稀释后台盼蓝染色计数。 1.2.2胸腹水标本的制备 将肝素抗凝的胸腹水标本， 400g离心10分钟， 弃上清。如有大量红细胞（25%），参考1.3去除。加入30mlRPMI 1640培