军牧一号白猪肉质主效基因多态性及其与初生重和断奶重相关分析.docVIP

军牧一号白猪肉质主效基因多态性及其与初生重和断奶重相关分析 　　摘要：氟烷、酸肉及心脏脂肪酸基因是猪的三个重要的肉质基因，对猪的肉质和生产性状具有很大的影响，为探索氟烷、酸肉及心脏脂肪酸基因与仔猪初生重和断奶重之间的关系，本研究采用PCR-RFLP的方法对军牧一号白猪氟烷、酸肉及心脏脂肪酸基因多态性进行了检测，通过对突变位点和初生重以及断奶重的关系进行分析，结果显示：氟烷基因NN基因型的初生重显著高于Nn型，各基因型断奶重间差异均不显著。 　　关键词：军牧一号白猪；氟烷基因；酸肉基因；心脏脂肪酸基因；初生重；断奶重 　　中图分类号：S858.28 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-09-0228-3 　　 　　0 前言 　　军牧一号白猪由中国人民解放军军需大学(现为吉林大学农学部)1998年利用杂交育种原理，将父本比利时施格猪的臀部特别突出性状与母本三江白猪的繁殖性能好、适应性强等优良性状有机结合，通过继代选育方式，横交固定，自群繁育5个世代培育成的瘦肉型猪[1]。具有生长快、饲料利用率高、胴体瘦肉率高、抗逆性能强等特点，尤其适合北方寒冷地区饲养[2]。氟烷、酸肉和心脏脂肪酸基因是三个与肉质相关的主效基因，其多态性分别与猪应激综合征(PSS)反应[3]、酸肉(acid meat)和肌间脂肪含量密切相关。采用PCR-RFLP技术，分析了氟烷基因、酸肉基因和心脏脂肪酸基因共5个多态性位点的多态性，并将其结果与军牧一号白猪的初生重和断奶重进行了相关性分析，为探索这三个肉质基因与猪初生重和早期生长性状的关系提供了一定参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 样本 实验选用吉林大学原种猪场的军牧一号白猪59头。 　　1.1.2 试剂 组织基因组DNA提取试剂盒（V-gene公司生产），Taq DNA聚合酶（宝泰克公司生产），限制性内切酶、DNA Marker、dNTPs、引物购自宝生物工程有限公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 组织DNA的提取 仔猪打耳号时收集耳组织样本，存于75%乙醇溶液中，-20℃保存，用组织基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。 　　1.2.2 PCR的扩增 　　（1）引物参考伍少钦[4]、梁全顺[5] 、高妍[6]等设计的引物，具体引物信息如下?? 　　氟烷基因：上游引物：5’-TCCAGTTTGCCACAGGTCCTACCA-3’ 　　下游引物：5’-ATTCACCGGAGTGGAGTCTCTGAG-3’ 　　片段长度：659bp 　　退火温度：61℃ 　　酸肉基因：上游引物：5’-GAGGCCCAAATAAGTCAATGTA-3’ 　　下游引物：5’-ACCGGGGTCAAATGCTC-3’ 　　片段长度：616bp 　　退火温度：62℃ 　　心脏脂肪酸基因：上游引物：5’-GGACCCAAGATGCCTACGCCG-3’ 　　（5’-上游区） 下游引物：5’-CTGCAGCTTTGACCAAGAGG-3’ 　　 片段长度：693bp 　　 退火温度：59℃ 　　心脏脂肪酸基因：上游引物：5’-TTGCTTCGGTGTGTTTGAG-3’ 　　（第二内含子区）下游引物：5’-CAGGAATGGGAGTTATTGG-3’ 　　 片段长度：816bp 　　 退火温度：63℃ 　　（2）PCR反应体系：DNA模板1μl，上游引物0.5μl，下游引物0.5μl，TaqDNA聚合酶0.5μl，Taq Buffer2.5μl，DNTP2.5μl，去离子水17.5μl。 　　反应条件：预变性94℃5分钟，变性94℃35秒，退火温度参照引物退火温度，35秒，延伸72℃35秒，35个循环，再延伸72℃10分钟。 　　1.2.3 酶切反应 共选用Alw211、BsrBI、Hinf I、HaeIII和MspI 5种限制性内切酶。氟烷基因的PCR扩增产物使用Alw211进行酶切；酸肉基因的扩增产物使用BsrBI酶切；脂肪酸基因5’-上游区的扩增产物使用Hinf I酶切；脂肪酸基因第二内含子区的扩增产物使用HaeIII和MspI分别进行酶切。酶切反应体系为10μl，其中PCR产物5μl，限制性内切酶0.5μl，酶切条件为37℃，8小时。 　　1.2.4 性状测定 对军牧一号白猪仔猪的初生重和断奶重进行测定。 　　1.2.5 数据的统计处理 对测得的基因型进行计数，统计基因频率和基因型频率，并对多态位点的基因型频率分布进行Hardy-Weinberg平衡检验，使用SPSS13.0软件计算各基因型的初生重和断奶重的最小二乘均值和标志误，对各基因型的初生重和断奶重进行正交设计方差分析，分析各基因型与初生重和断