花椰菜胚性愈伤组织cdna-aflp分析及ef-1α和lec1 cdna克隆-cdna - aflp analysis of cauliflower embryogenic callus and cloning of ef - 1α and le c1 cdna.docx

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2018-05-28 发布于上海
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花椰菜胚性愈伤组织cdna-aflp分析及ef-1α和lec1 cdna克隆-cdna - aflp analysis of cauliflower embryogenic callus and cloning of ef - 1α and le c1 cdna

2.4花椰菜体细胞胚胎的成熟142.5花椰菜体细胞胚胎的萌发143讨论153.12,4-D、NAA能有效的诱导花椰菜胚性愈伤组织发生153.2添加少量的IBA能有效的促进花椰菜体胚成熟15第三章花椰菜胚性愈伤组织CDNA-AFLP的建立171材料171.1试验材料171.2主要仪器171.3主要试剂172试验方法172.1花椰菜胚性愈伤组织总RNA的提取与检测172.2cDNA的合成及纯化182.3双酶切和特定接头连接182.4预扩增192.5选择性性扩增体系的优化192.6聚丙烯酰胺凝胶电泳212.7差异片段的回收、纯化233结果及分析243.1总RNA的提取243.2双链cDNA的质量253.3预扩增结果263.4各因素水平对选择性扩增试验的影响263.5部分聚丙烯酰胺凝胶电泳结果图303.6差异片段的分离与二次扩增313.7测序结果及功能分析324讨论364.1花椰菜胚性愈伤组织总RNA的提取、cDNA的合成、酶切364.2选择性扩增体系优化374.3聚丙烯酰胺凝胶电泳374.4差异片段TDFs功能讨论37第四章花椰菜胚性愈伤组织EF-1ΑCDNA的克隆401材料401.1植物材料401.2仪器设备401.3主要试剂411.4引物合成412方法412.1总RNA的提取与检测412.2花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNA引物设计412.3花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNA克隆扩增体系及程序422.4花椰菜胚性愈伤组织EF-1α保守区的同源克隆422.5花椰菜胚性愈伤组织EF-1α3-RACE422.6花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNA5-RACE422.7花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNAORF扩增432.8测序及生物信息学分析433结果与分析433.1花椰菜胚性愈伤组织EF-1α保守区序列的获得433.2花椰菜胚性愈伤组织EF-1α3端的扩增443.3花椰菜胚性愈伤组织EF-1α5端的扩增453.4花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNA全长的获得463.4花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNAORF的获得484EF-1Α基因生物信息学分析494.1花椰菜胚性愈伤组织EF-1αcDNA序列同源性分析494.2花椰菜胚性愈伤组织EF-1α理化性质预测及分析504.3花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白质保守区的预测及分析514.4花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白跨膜结构预测与分析514.5花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白信号肽的预测和分析524.6花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白质二级结构分析524.7花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白质磷酸化位点预测与分析524.8花椰菜胚性愈伤组织EF-1α蛋白质三维结构分析53第五章花椰菜胚性愈伤组织LEC1CDNA的克隆551材料552方法552.1总RNA的提取与检测552.2花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA克隆引物设计552.3花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA克隆扩增体系及程序552.4花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA保守区PCR扩增552.5花椰菜胚性愈伤组织LEC13-RACE562.6花椰菜胚性愈伤组织LEC15-RACE562.7测序及生物信息学分析563结果与分析563.1花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA保守区序列的获得563.2花椰菜胚性愈伤组织基因LEC13端的扩增573.3花椰菜胚性愈伤组织LEC15端的扩增593.4花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA全长的获得604LEC1基因生物信息学分析614.1花椰菜胚性愈伤组织LEC1cDNA序列同源性分析614.2花椰菜胚性愈伤组织LEC1理化性质预测及分析624.3花椰菜胚性愈伤组织LEC1蛋白质保守区的预测及分析624.4花椰菜胚性愈伤组织LEC1蛋白跨膜结构预测与分析634.5花椰菜胚性愈伤组织LEC1蛋白信号肽的预测和分析634.6花椰菜胚性愈伤组织LEC1蛋白质二级结构分析64第六章小结661花椰菜体细胞胚胎发生及其再生体系的建立662利用CDNA-AFLP技术分析花椰菜体胚发育差异表达基因663花椰菜胚性愈伤组织EF-1ΑCDNA的克隆664花椰菜胚性愈伤组织的LEC1CDNA克隆67参考文献68附录1图版及图版说明79致谢82缩略词缩写词英文全称中文名称IAA2,4-DIndole-3-aceticacid2,4-dichlorophenoxyaceticacid吲哚乙酸2,4－二氯苯氧乙酸NAAα-naphthaleneaceticacidα-萘乙酸IBAIndole-3-butytricacid吲哚丁酸ECEmbryogeniccallus胚性愈伤组织lxLux勒克斯MS6-BAMurashigeandSkoog6-(Benzylamino)purineMS培养基6-(苄胺基)嘌呤ABAabsci