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单增李斯特菌检测技术2012广东省 CDC 赖蔚苳
单增李斯特菌检测技术
广东省CDC赖蔚苳
2012.3.28
李斯特菌属
必威体育精装版的分类学研究表明,其分为六个种:
单核增生李斯特氏菌(Listeria
monocytogenes )
伊氏李斯特氏菌(Listeria ivanovii)
英诺克李斯特氏菌(Listeria innocua)
斯氏李斯特氏菌(Listeria seeligeri)
威氏李斯特氏菌(Listeria welshimeri)
格氏李斯特氏菌(Listeria grayi)
单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病,感
染后主要表现为败血症、脑膜炎和流产等。它广泛
存在于自然界中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳
制品、蔬菜等都可被污染。该菌在4℃的环境中仍
可生长繁殖,是冷藏食品威胁人类健康的主要病原
菌之一。
其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷
人群。大多数发达国家人类李斯特菌病发生率约为
每一百万人2-15例,死亡率为13-34%
加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌
病暴发,导致十几人死亡。很多国家都已经采取措
施来控制食品中的单增李斯特氏菌,并制定了相应
的标准。
形态与染色
革兰氏阳性小杆菌,长0.5~2 μ m ,宽
0.4~0.6 μ m,直或稍弯,常呈V 字形,成对
排列。
无芽胞,一般不形成荚膜。
22~25 ℃环境中形成4 根鞭毛,运动活泼;
32 ℃时仅形成一根鞭毛,动力缓慢。
培养特性
需氧或兼性厌氧,营养要求不高;
在22 ℃~25 ℃培养有动力,穿刺培养2~5 天可见
倒立伞状生长,肉汤培养物在显微镜下可见翻跟斗
运动。
生长温度:2 ℃~42 ℃,最适培养温度为35 ℃~37
℃。
pH 范围:pH 4.0 ~pH 9.0 ,最适宜生长pH 5.5
按2012食源性致病菌监测工作手册
定性检测
定量检测
定性检测
增菌培养:LB1增菌液225 mL,于30℃培养
24h, 吸取0.1 mL,加入10mL LB2增菌液中
二次增菌。
分离培养:LB2 二次增菌液转种于选择培养基
PALCAM和科玛嘉琼脂平板上,于37℃培养
24 h,观察各个平板上生长的菌落, 。
各个平板上的菌落特征见表
MMA PALCAM OXA CHROMagar
30℃48h菌 37℃24h- 30℃24h- 37℃18h-
落针尖大小、 48h,2mm灰 48h,2mm灰 24h,蓝色菌
形态不典型, 绿色中心黑色 黑色菌落周围 落周围呈白
与杂菌难区 凹陷,菌落周 呈棕黑色水解 色晕圈
分抑制性强 围呈棕黑色水 圈
解圈
MMA抑制性强,菌落小、形态不典型,很难与
杂菌区分
进口PALCAM 、进口OXA菌落较典型,易与杂
菌区分
CHROMagar菌落较典型,易与杂菌区分,对
高污染食品中的杂菌抑制性较差
L.M在PALCAM培养基生长特征
L.M在OXA培养基生长特征
单增李斯特菌在科玛嘉李斯特显色培养基上
的菌落形态
染色镜检
将上述可疑纯培养物做革兰氏染色并做湿片检查;
利斯特菌为革兰氏阳性短杆菌, 大小为0.4 ~
0.5μm×0.5 ~2.0μm;用生理盐水制成菌悬液,
在油镜或相差显微镜下观察, 该菌出现轻微旋转或翻
滚样的运动。
该菌为革兰氏阳性无芽孢杆菌,在纯培养物中呈短
小杆菌,在初龄培养物中呈球杆菌状,在老龄培养
物中呈长丝的长杆菌状,有些细菌因此而变成革兰
氏阴性;为需氧或兼性厌氧菌,在20 ~25℃培养时
能形成4根鞭毛,运动活泼;在37℃培养时无鞭毛,
运动消失。
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