试验方案抗寒性.doc

金光杏梅的抗寒性 一、电导率的测定 1.1．实验材料：金光杏梅的枝条 1.2．实验器材：10ml刻度试管，剪刀，电导仪，冰箱，天平，水浴锅，比色皿, 药匙，烧杯 1.3．实验试剂： 　1.3.1．蒸馏水　　1.3.2.去离子水 1.4．试验方法： 　　将供试1年生枝条用自来水和蒸馏水冲洗干净后放入冰箱中分别在，-10、-15、-20、-25、-30、-35的温度梯度下冷冻4小时后取出，放在4摄氏度冷藏冰箱中解冻，然后测其相关指标。每个指标测定重复3次,对照材料沙藏于4摄氏度的条件下。 　　取低温处理后的枝条，用去离子水冲洗干净，避开芽眼，剪成3-5毫米的薄片，混合均匀，称取一克放入刻度试管中，加10毫升去离子水，在室温下静止12小时后测定其初电导值（电导仪型号为DDS-11A）煮沸30分钟后，室温下静止5小时，再测其终电导值，得到相对电导率，logistic方程Y=K(1+ae-bx)(K=100%)计算各样品的半致死温度。 二、丙二醛含量的测定（ＭＤＡ） ２.1．实验材料：金光杏梅的枝条 ２.2．实验器材：10ml试管，剪刀，721型分光光度仪，离心机，离心管３个，研钵研杵））分光光度计，分析天平，离心机，水浴锅，具塞刻度试管，刻度吸管，个100mL一个容量瓶，研钵1．斐林试剂A液：4gCuSO4·5H2O溶解于蒸馏水定容至100mL?。 2.斐林试剂B液20g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·）与15gNaOH溶于蒸馏水中，并定容至100mL。A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。?? 3. 0.1％葡萄糖标准液：取80下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100mL?。 4. 0.1mol/LNaOH。 5.甲基红指示剂： 0.1g甲基红溶于250mL60％乙醇中。6. 10％Pb(Ac) 2?。 7.饱和NaSO4。?3.4．１标准曲线的制作取7支试管，按表分别加入各溶液。 还原性糖测定时绘制标准曲线的试剂量试剂 管号 0﹒1%葡萄糖标准液（ml） 蒸馏水） 每管含葡萄糖量（ml） 斐林试剂(ml) 4 4 4 4 4 4 4 　　将以上各管混合后加塞，于沸水浴中加热15?min?。取出后自来水冷却， 1500r/min离心15min。取上清液，用分光光度计在590nm波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘制标准曲线。 ?样品中还原糖的提取取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取3.00g，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入大试管中。体积为10～15mL时，加2～3滴甲基红指示剂，如呈红色，可用0.1mol/L的NaOH?中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉3.00g，先在烧杯中用少量水湿润，然后用水洗入250mL容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。 ?将大试管置于80的恒温水浴中保温30min，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品，此间可加10％Pb(Ac)，除去蛋白质至不再产生白色絮状沉淀时，加饱和除去多余的铅离子。30min后取出冷却，将提取液全部转入100mL容量瓶中。定容至刻度，摇匀后过滤待测样品测定吸取6mL待测液，加4mL斐林试剂，其他操作与标准曲线相同，在590nm波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖含量。 ?结果计算）(Biuret)法测定蛋白质含量 ４.1实验材料：金光杏梅的枝条 ４.2实验器材：10ml具塞试管，离心管，研钵，研杵5ml移液管， 坐标纸，721分光光度计，比色皿，烧杯，天平，药匙 ４.3实验试剂: ４.3．１．双缩脲试剂：取CuSO 4·5H 20(c.P.)1.5g和酒石酸钾钠(c.P.)6.0g以少量蒸馏水溶解，再加2.5mol／L NaOH溶液300ml，KI 1.0g，然后加水至1000ml。棕色瓶中避光保存。长期放置后若有暗红色沉淀出现，即不能使用。 ４.3．2．标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）１０ｍｇ，再用0.9%NaCl溶解(c.P.) CuSO 4·5H 20（五水硫酸铜） NaOH（氢氧化钠） 4.4． 试验方法： [操作步骤] 取6支干燥洁净试管，编号，按下表加入试剂： 加入物（ml） 0 1 2 3 4 5 标准蛋白液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蛋白浓度（mg/ml） 37℃水浴20分钟，冷却至室温，在分光光度计波长540nm处，用空白管调零，读取各管吸光度值。1～5为标准曲线管，测得吸光度后，以吸光度为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线。以测定管