酵母表达经验贴.docx

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以pPIC9K为例,pPIC9K是用于在毕赤酵母中的多拷贝整合分泌表达蛋白的穿梭载体,利用组氨酸缺陷型标记进行互补筛选。一、信号肽的2步切割pPIC9K载体带有自身信号肽,在分泌过程中被切除,但是由于切割效率,在目的产物N端带有3-5个左右的信号肽的氨基酸。设计引物时,为了防止切割不完全,能去掉GluAla两个重复单位,不过文献报道多个Glu会提高kex2的切割效率。要求目的蛋白中不能含有信号肽酶切割序列:glu-lys-arg-glu-ala-glu-ala。信号肽的切除分为两步:kex2在glu-lys-arg和glu-ala-glu-ala之间初步切除,STE123在两个glu-ala之

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