定量PCR基本原理---QST.pdf

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2018-05-24 发布于浙江
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定量PCR基本原理---QST

实时荧光定量PCR基本原理介绍栾鹏涛Ph.D. Field Application Scientist Tel: 800 820 8982 / 400 820 8982 The world leader in serving science 什么是实时荧光定量PCR? •一种实时监控核酸扩增的技术在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化对PCR过程进行实时监控，以此实现对初始模板的定量分析。 2 定量PCR如何工作? • PCR反应液加入了各种类型的荧光标记物 PCR循环：变性、退火、延伸 3 TaqMan探针法 •TaqMan水解探针：5′ 端荧光报告基团与靶基因特异性结合的序列 3′ 端淬灭基团报告基团淬灭基团 4 TaqMan水解探针作用机理 •完整的探针： •切断的探针：检测不到报告荧光检测到报告荧光激发光激发光能量荧光共振能量转移，FRET 5 变性(95ºC) 6 退火(60ºC) 7 8 9 10 11 12 ? 13 5′-3′外切酶活性 水解探针，使报告基团和淬灭基团分离 14 15