实验一-分光光度计的性能检查.docx

实验一 分光光度计的性能检查(一)?实验目的?1、掌握分光光度计的性能检查指标。?2、熟悉仪器检查的意义及一般检查方法。3、了解分光光度计的正确使用方法。(二)?实验原理?分光光度计利用单色器(光栅、棱镜)获得单色光，仪器的波长读数应有一定的准确度，测量溶液的透光率(或吸光度)应具有足够的灵敏度和重现性。?当溶液浓度改变时，仪器测定值的改变在一定范围内应符合Beer定律，即仪器应具有较好的线性。?成套比色皿中各比色皿的透光性能应相同。实际工作中，同厚度的比色皿由于材料、工艺等原因，往往透光率不一致，影响测定结果，故使用前需进行配对性试验。(三)?仪器与试剂?仪器:?分光光度计；比色皿；镨钕滤光片；电子天平；容量瓶。试剂:?K2Cr2O7、CuSO4、CoCl2、蒸馏水。(四)?实验步骤?1、比色皿配对性检查 同种厚度的比色皿之间，透光率误差应小于0.5%。检查方法如下:?精密移取0.02mol/L的K2Cr2O7，溶液10m1至25m1容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，备用。取稀释后的溶液分别注入厚度相同的几个比色皿中。在440.0m波长处，以空气做空白，调透光率为100%。分别测定各比色皿中溶液的透光率，然后选择相差不大于0.5%的比色皿配对使用。?2.波长精度检查 测量800～812nm范围内，不同波长下镨钕滤光片的透光率，通过记录T值最小时，即A最大时的波长λ，进行仪器波长精度确认(波长值应在806～810nm内，符合要求)。?3.线性误差 分别在440、510、690nm处测量表3-3中K2Cr2O7、CoCl2、CuSO4三种溶液的不同浓度的吸光度，根据K=（A1+A2+A3）/(C1+C2+C3)；A误差=（A-A）/A×100% 计算其线性误差。?4.灵敏度(ΔA/ΔC，μg/ml)??测量表3-4中K2Cr2O7、CoCl2、CuSO4三种溶液的不同浓度的吸光度，计算不同波长下仪器的灵敏度（ΔA/ΔC）。?5.重现性(ΔT) 取2000μg/ml CuSO4溶液，在690nm连续测定7次透光率，计算Tmax与Tmin之差。（如小于0.5%，则符合要求）(五)?数据记录与处理1、比色皿配对性检查（表3-1）表3-1 配对性检查结果表比色皿号1234测量值（T）100%ΔT应小于0.5%。2、波长精度检查 测量800～812nm范围内，不同波长下镨钕滤光片的透光率（表3-2）表3-2 波长精度检查结果表λ800801802803804805806TλT807808809810811812T值最小时，即A最大时波长λ与808nm相对比，波长偏差应小于2nm。3、线性误差 按照表3-3中溶液的不同浓度测定吸光度，并记录。表3-3 线性误差检查结果表溶液C（μg/ml）λmaxAKAA误差K2Cr2O73090150440A1A2A3CoCl22000600010000510A1A2A3CuSO42000600010000690A1A2A34、灵敏度(ΔA/ΔC，μg/ml) 测量下表中三种溶液的不同浓度的吸光度，计算不同波长下仪器的灵敏度（表3-4）.表3-4 灵敏度检查结果表溶液C1（μg/ml）C2（μg/ml）λ（nm）ΔAΔA/ΔCK2Cr2O7300330440CoCl220002200510CuSO420002200690各溶液灵敏度测定值在规定范围内（见附录2），说明仪器有较高的灵敏性。5.重现性(ΔT) CuSO4 2000μg/ml在690nm连续测定7次透光率，Tmax与Tmin之差小于0.5%，说明仪器重现性符合要求（表3-5）。表3-5 重现性检查结果表次数1234567ΔTT(六)?注意事项在不同波长下测定时，注意用空白溶剂调整T为100%。(七)?实验提示在进行不同样品溶液测定时，需要强化比色皿的润洗以保证溶液浓度一致。(八)?思考题1、哪些性能指标是在日常测定工作中经常需要进行检查的??为什么?2、影响波长精度的因素有哪些?附:1、线性误差规定表吸光度范围线性误差0.1～0.3±6%内0.3～0.6±3%内0.6～0.8±4%内2、灵敏度规定表溶液灵敏度（吸光度/μg/ml）测定波长重铬酸钾≥0.01/2.5440nm氯化钴≥0.01/150510nm硫酸铜≥0.01/150690nm