rnf180基因dna启动子区域甲基化检测对肝细胞癌发癌风险预测及预后判断价值.pdfVIP

中文摘要 险预测及预后的判断价值 摘 要 目的：肝细胞癌的发病率高、预后差，近年肝细胞癌的发病率及病死 率逐渐上升，其致病原因及发病机制尚未完全明确。随着分子生物学的发 展及基因检测技术的进步，我们对抑癌基因的甲基化在肿瘤形成与发展中 的作用越来越重视。具有泛素连接酶活性的环指蛋白能够通过调节靶蛋白 底物的泛素化而在细胞生长及发育过程中发挥作用，其中环指蛋白180 (the 80)是一种膜结合的E3泛素连接酶，包含 ringfingerprotein，RNFl RING 一个新发现的抑癌基因，有报道认为RNFl80基因DNA启动子区域高甲 基化在胃癌发生、发展中具有重要的作用，是胃癌患者的潜在临床生物学 指标。虽然已证实RNFl80基因DNA甲基化与胃癌的发生有关，但该基 因与其他肿瘤性疾病的关系尚未见报道，因此本实验欲研究RNFl80基因 DNA启动子区域甲基化与肝细胞癌发癌风险的关系，该研究以新鲜肝脏 组织为标本，采用甲基化特异性聚合酶链反应(MethylationPCR, Specific 启动子区域的甲基化状态及其mRNA表达情况，分析该基因与临床特征、 DNA启动子区域 病理学特征及生存期预后的关系，为抑癌基因RNFl80 甲基化检测的临床应用提供理论依据，阐明RNFl80基因DNA启动子区 域甲基化在肝细胞癌发生、发展中的作用，进一步完善甲基化修饰的抑癌 证据。 方法： 院肝胆外科行手术切除的肝细胞癌的病例50例、对应癌旁肝硬化的病例 50例、正常肝脏组织的病例5例。本实验研究对象男性45例，女性5例， 中文摘要 象在行手术切除之前均没有进行过化疗或放疗。标本切除后立即保存于液 氮中后保存于．80℃冰箱备用。所有标本常规石蜡包埋，HE染色，最后由 2名病理科医师诊断证实为肝细胞癌、肝硬化及正常肝脏组织。搜集患者 吸烟史、饮酒史、肝炎病史、家族史等病史，登记患者血常规、凝血功能、 肝功能、AFP等实验室资料，记录患者肿瘤大小、个数、是否合并瘤栓 及病理分化程度等病理学资料。通过电话联系或信访的方式对患者进行随 访。 DNA启动子区域甲基化检测方法：新鲜肝组织 2抑癌基因RNFl80 DNA采用传统的酚一氯仿方法提取，经过亚硫酸氢盐的处理后， genomic 用Wizard DNA，然后应用甲基化特异性 DNA纯化试剂盒纯化genomic PCR 180进行目的 PCR(MethylationSpecificMSP)技术对抑癌基因RNF 片段的扩增，扩增后的产物通过电泳凝胶成像系统进行甲基化结果的分析 判定。 RNFl80基因的DNA甲基化上游引物为： 5-GACGTGGGGCGAG仉螂GTCGTT_3’，RNF180基因的DNA甲基化 RNF180基 因的DNA非甲基化上游引物为： ．3’， RNFl 5’． 80基因的DNA非甲基化下游引物为： CCAACCAAAACCAAATCCCTCCAAA一3’。 录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测mRNA的表达情况。 4统计学分析：实验数据使用SPSS13．0统计软件进行统计学分析， 计量资料采用t检验或非参数检验，计数资料采用X2检验或Fisher确切 检验，多因素分析采用COX模型。以P0．05认为具有统计学意义。 结果： 1肝细胞癌、肝硬化及正常肝脏组织中RNFl80基因DNA启动子区 域甲基化表达及比较 RNFl80基因DNA在肝细胞癌组织、肝硬化组织中