华蟾素注射液对前列腺癌pc3细胞增殖抑制及vegf 2fkdr表达的影响.docxVIP

分类号R6密级公开UDC硕士学位论文华蟾素注射液对前列腺癌 PC3细胞增殖抑制及 VEGF/KDR表达的影响学位申请人：曾欢学科专业：外科学指导教师：宋兴福教授二○一二年五月A Dissertation Submitted in Partial Fulfillment of the Requirements for theDegree of Master of MedicineEffect of Cinobufacin on Proliferation and VEGF /KDRmRNA and Protein Expression Levels of Prostate CancerPC3 Cell LineGraduate Student:Major:Supervisor:Zeng HuanSurgeryProf. Song XingfuChina Three Gorges UniversityYichang, 443002, P.R.ChinaMay, 2012三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名：日期：三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认：我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺：我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文、进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第一作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的一切法津和经济后果。学位论文作者签名：I日期：三峡大学硕士学位论文内容摘要目的：探讨华蟾素注射液对前列腺癌 PC3细胞的增殖、凋亡、侵袭能力及VEGF/KDR mRNA 及蛋白表达的影响。方法：(1) 体外培养前列腺癌 PC3 细胞株，采用 MTT（四甲基偶氮唑蓝）法检测不同浓度华蟾素注射液（0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l）对前列腺癌 PC3细胞增殖的影响,同时设立空白对照组。（2）FCM 法分析该药对 PC3 细胞周期分布的影响。(3) DNA Ladder 检测细胞凋亡情况。（4）细胞划痕试验检测药物对 PC3 细胞的迁移能力的影响。(5) RT-PCR 法检测经药物处理 PC3 细胞后对 VEGF/KDRmRNA 表达水平的影响。(6) 蛋白印迹法检测药物处理 PC3 细胞后，细胞中 VEGF及 KDR 蛋白表达水平的变化。结果：(1) MTT 法检测结果显示，不同浓度华蟾素注射液（0.25 mg/l、2.5 mg/l、5 mg/l、10mg/l）能有效抑制前列腺癌 PC3 细胞的增殖作用，随着药物浓度的增加及作用时间的延长，药物的作用效果明显增加，并对其生长抑制率进行组间和组内统计学分析，均具有统计学意义（P 0.05）,表明华蟾素对 PC3 细胞的抑制作用具有一定的浓度和时间依赖性。(2) FCM 法检测 PC3 细胞分布比例可见用华蟾素注射液作用后，G1/G0 期细胞比例显著减少，S 期细胞比例显著增加，而 G2/M 期细胞比例变化不大，经统计学分析P0.05。表明 Cino 能将 PC3 细胞阻滞在 S 期从而抑制细胞的增殖。）DNA 凝胶电泳法检测到药物处理后出现明显的梯度条带，DNA 出现不同程度的降解，表明 Cino 抑制细胞生长在一定程度上是通过诱导凋亡来实现的。(4)细胞划痕试验发现华蟾素注射液具有一定抑制 PC3 细胞迁移的能力及抑制细胞生长的作用。(5)RT-PCR 法检测结果显示华蟾素注射液降低 VEGF/KDR RNA 表达水平从而起到抑制作用，且根据灰度分析得到随着药物浓度增高其表达水平逐渐降低。 6）蛋白质印迹法检测结果显示，不同浓度华蟾素注射液（2.5、5、10mg/l）处理 PC3细胞 48h后,随着药物浓度的增加 VEGF和 KDR蛋白表达量逐渐降低，具有一定的浓度依赖性。结论：华蟾素注射液可以抑制前列腺癌 PC3细胞的生长，并呈一定的时间-剂量依赖性关系，测得 IC50约为 6.5mg/l，最佳作用时间为 48h；华蟾素注射液对前列腺癌 PC3细胞有明显的诱导凋亡作用，并能使肿瘤细胞阻滞于 S期；华蟾素注射液在一定程度上可以抑制前列腺癌 PC3细胞的迁移能力；华蟾素注射液可以明显降低VEGF及 KDR蛋白及 mRNA的表达水平，从而