浅析高效液相色谱法对乳制品中三聚氰胺应用.docVIP

浅析高效液相色谱法对乳制品中三聚氰胺应用 　　摘要：本文详细阐述了高效色谱法在乳制品检验三聚氰胺的应用。 　　 　　前言 　　1试验材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　1.1.1Agilent1200高效液相色谱仪（美国Agilent公司），超声波清洗仪、离心机、真空抽滤器、漩涡混合器。 　　1.1.2甲醇：色谱纯 ； 　　1.1.30.024mol/L磷酸二氢钾：准确称取3.2g磷酸二氢钾（分析纯），用高纯水溶解，定容至1000mL，过0.45μm滤膜； 　　1.1.422g/L乙酸铅：准确称取22g乙酸铅（分析纯），用高纯水溶解，定容至1000mL； 　　1.1.510g/L三氯乙酸：准确称取10g三氯乙酸（分析纯），用高纯水溶解，定容至1000mL； 　　1.1.6三聚氰胺标准储备液：准确称取0.1000g三聚氰胺（＞99.9%），用50%（V/V）甲醇水溶解并定容至 100mL,三聚氰胺含量为1mg/mL；再用甲醇水梯度稀释成1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0micro;g/mL的标准溶液。 　　1.2色谱条件 　　色谱柱：强阳离子交换色谱柱ZORBAX 300-SCX（4.6mmΧ150mm，5μm，Agilent）；流动相：0.024mol/L磷酸二氢钾：甲醇=90：:10（V:V）；流速：1mL/min；柱温：35℃；进样量：20μL；检测器：二极管阵列检测器（DAD），检测波长235 nm。 　　2样品处理 　　2.1 奶粉 　　称取5g（精确至0.01g）于50mL比色管中，加入10mL乙酸铅溶液（1.1.4），漩涡混合1min，用三氯乙酸溶液(1.1.5)定容至50mL，混匀后，放入超声波清洗仪超声加热提取15min后(温度为45℃)，以不低于10000r/min离心10min，取上清液过微孔滤膜（0.45μm）后，供HPLC测定。 　　2.2 液态奶（原料乳、纯牛奶、酸奶、含乳饮料、植物蛋白饮料） 　　称取10g（精确至0.01g）于50mL比色管中，加入10mL乙酸铅溶液（1.1.4），10mL三氯乙酸 (1.1.5)，用高纯水定容至50 mL，余下同1.3.1中“……，供HPLC测定。 　　3结果与分析 　　3.1色谱图 　　在1.2色谱条件下，得到三聚氰胺标准色谱图，走样时间15min,标准品保留时间10min左右。 　　 　　图1三聚氰胺HPLC标准色谱图 　　Figure 1. Chromatogram of melamine standard by HPLC 　　3.2 光谱图 　　如图所示，三聚氰胺在波长为235nm处具有较大吸收，因此选择在波长为235nm下进行检测；根据三聚氰胺光图谱可以对样品进行初步定性。 　??? 　　图2三聚氰胺光谱图 　　Figure 2 .Spectrogram of melamine 　　3.3线性范围和检出限 　　在选定的色谱条件下，进样20μL，以三聚氰胺质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表一与图三所示；回归方程为y=65.527x-37.619,相关系数R=0.9999，说明在1.0～100.0micro;g/mL范围内存在良好线性关系。根据信号与噪声比值大于3时作为检出限，得出本方法检出限为0.3micro;g/mL。 　　表一 浓度与峰面积线性 　　Table 1 Concentration and peak area linear 　　三聚氰胺 　　浓度micro;g/mL 1.0 5.0 10.0 20.0 50.0 100.0 　　峰面积 59 303 607 1243 3219 6531 　　 　　图3三聚氰胺标准曲线 　　Figure 3. Calibration curve of melamine 　　3.4回收率与精密度 　　选择三种不同的样品（奶粉、纯牛奶）添加三种浓度的标准品，分别按照以上样品处理方法与GB/T22388-2008提取，测定三聚氰胺的质量浓度、加标回收、相对标准偏差见表二与表三 　　表二 改进方法回收率与精密度（n=6） 　　Table 2 Spiked recoveries and precision of improved method 　　样品名称 本底值 　　micro;g/mL 加标量 　　micro;g/mL 测得值 　　micro;g/mL 回收率 　　% 相对标准偏差 　　% 　　奶粉 0 5.0 5.04 100.7 2.93 　　 10.0 9.75 97.5 2.12 　　 20.0 20.0 100.0 1.36 　　纯牛奶 0 5.0 4.