测定项目及方法.doc

实验测定项目及方法 好果率: 好果率（%）=（好果数/果子统计总数）×100% 以未发生病害，冷害，机械性损伤和霉变的果实为好果，通过技术和数学的方法进行统计。 果实硬度： 应用果实硬度计（GY-1 型果实硬度计）。 果实硬度计设计原理 果实硬度是指水果单位面积（S）承受测力弹簧的压力（N），它们的比值定义为果实硬度（P）。P =N/SP—被测水果硬度值105帕或（公斤每平方里米）N—测力弹簧压在果实面上的力 N牛顿或(公斤)S—果实的受力面积 平方米或(平方厘米) GY-1果实硬度计使用方法测量前：转动表盘，使驱动指针与表盘的第一条刻度线对齐（GY-1型的为刻度线2，GY-2和GY-3型的为刻度线0.5）；将待测水果削去1平方厘米左右的皮。测量：用手握硬度计，使硬度计垂直于被测水果表面，压头均匀压入水果内，此时驱动指针开始驱动指示指针旋转，当压头压到刻度线（10毫米）处停止，指示指针指示的读数即为水果的硬度，取三次平均值。测量后：旋转回零旋钮，使指针复位到初始刻度线。-A）-0.56A 式中：A、A、A分别代表450nm、532nm和600nm波长下的吸光度值。用公式可直接求的植物样品提取液中MDA的浓度，进一步算出其在植物组织中的含量。 材料、仪器、试剂： 材料：所选植物材料 仪器：研钵、试管、可调加样器、恒温水浴锅、冷冻离心机、分光光度计。 试剂；1．5%三氯乙酸（TCA）。 2．0.67%（W/ V）硫代巴比妥酸（TBA） 用10%的TCA配制。 步骤：1. 取0.5g植物样品，加5%TCA 5ml，研磨后所得匀浆在3000r/min 下离心10min。 2. 取上清液2 ml，加0.67%TBA 2 ml，混合后在100℃水浴上煮沸30min，冷却后再离心一次。 3. 分别测定上清液在450nm、532nm和600nm处的吸光度值。并按照公式算出MDA浓度。 多酚氧化酶活性： 多酚氧化酶活性；儿茶酚比色法 器材与试剂 1、仪器：低温离心机、s22pc分光光度计 2、试剂：儿茶酚、pH 4.6磷酸缓冲液 3、材料：所用实验材料 实验步骤： 1．称取实验材料0.5克，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，少许PVP，研磨匀浆，转移到离心管，再用2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液。4℃ 5000rpm离心15分钟，上清液即为粗酶液。 2．在试管中，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，1.5mL 儿茶酚以及1mL 粗酶液，空白调零以1mL磷酸缓冲液代替粗酶液。 3．A值测定：加入粗酶液后迅速混匀，立刻于525nm下测定反应体系的A值，每隔30秒记录一次，共记录5次。 4．计算酶活力。按下式计算 PPO活性＝U/min gFW A值增加0.001定义为一个酶活力单位。 计算所测材料的PPO活性。选择A值变化均匀的三组数值求平均值。 过氧化物酶活性：愈创木酚比色法 材料、仪器、试剂： 材料：所用实验材料。 仪器：可见光分光光度计；离心机；研钵；容量瓶；量筒；试管；吸管。 试剂：0.05mol/LpH5.5磷酸缓冲液；0.05mol/L愈创木酚；2%HO；20%三氯乙酸。 实验步骤： 酶液的制备 取5.0g洗净去皮的实验材料，放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆全部转移到离心管中，于3000rmp离心10min，上清液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取2次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。 过氧化物酶活性测定 酶活性测定的反应体系包：0.05mol/L磷酸缓冲液2.9ml，2% HO1.0ml，0.05mol/L愈创木酚1.0ml和1.0ml酶液。用加热煮沸5min的酶液为对照，反应体系加入酶液后，立即于37℃水浴中保温15min，然后迅速转入冰浴中，并加入20%三氯乙酸2.0ml终止反映，然后过滤（或5000r/min离心10min），适当稀释，470nm波长下测定吸光度。 结果计算： 以每分钟A变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（U） 过氧化物酶活性【U/（g·min）】=（ΔA×V）／（W×V×0.01×t） 式中：ΔA为反应时间