第5章仪器分析ppt 分子发光分析法.ppt

* 5.溶液荧光的猝灭（P95） 荧光物质分子与溶剂分子或其它溶质分子的相互作用引起荧光强度降低的现象称为荧光猝灭。能引起荧光强度降低的物质称为猝灭剂。 导致荧光猝灭的主要类型： ① 碰撞猝灭（主要类型之一） 碰撞猝灭是指处于激发单重态的荧光分子与猝灭剂分子相碰撞，使激发单重态的荧光分子以无辐射跃迁的方式回到基态，产生猝灭作用。 * ② 静态猝灭（组成化合物的猝灭） 由于部分荧光物质分子与猝灭剂分子生成非荧光的配合物而产生的。此过程往往还会引起溶液吸收光谱的改变。 ③ 转入三重态的猝灭 分子由于系间的跨越跃迁，由单重态跃迁到三重态。转入三重态的分子不发射荧光而使荧光猝灭。 溶液中的溶解氧可对有机化合物的荧光产生猝灭效应。 * ④ 发生电荷转移反应的猝灭 某些猝灭剂分子（如Fe2＋）与荧光物质分子（如甲基蓝）发生了电荷转移反应，使其荧光猝灭。 ⑤ 荧光物质的自猝灭 在浓度较高的荧光物质溶液中，单重激发态的分子在发生荧光之前和未激发的荧光物质分子碰撞而引起的自猝灭。有些荧光物质分子在溶液浓度较高时会形成二聚体或多聚体，使它们的吸收光谱发生变化，也引起溶液荧光强度的降低或消失。 * 五、荧光光谱仪 测量荧光的仪器主要由四个部分组成：激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器；检测器与激发光方向成直角。 基本流程如图： 单色器：选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器； 光源：氙灯和高压汞灯，染料激光器(可见紫外区) 检测器：光电倍增管等。 * 仪器光路图 * 磷光检测（磷光光谱仪） 荧光计上配上磷光测量附件即可对磷光进行测量。可在有荧光发射的同时测量磷光。 测量方法： （1）通常借助于荧光和磷光寿命的差别，采用磷光镜的装置将荧光隔开。 （2）采用脉冲光源(即时间分辨技术)。 室温测量时，不需要杜瓦瓶。 * 六、分子荧光分析法及其应用 1. 特点 （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级，检测下限：0.1～0.001?g/ml （2）选择性强 既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱来鉴定物质； （3）试样量少、方法简便 （4）提供较多的物理参数 缺点：应用范围小。 * 2.定量依据与方法 (1)定量依据 荧光强度 If正比于吸收的光强Ia和荧光量子效率? ： If = ? Ia 由朗伯-比耳定律： Ia = I0(1-10-? l c ) If = ? I0(1-10-? l c ) = ? I0(1-e-2.3? l c ) 浓度很低时，将括号项近似处理后： If = 2.3 ? I0 ? l c = Kc 即荧光强度与荧光物质的浓度成正比，但这种线性关系只有在极稀的溶液中（A＝?lc?0.05）才成立。对于较浓溶液，由于猝灭和自吸收等原因，使荧光强度和浓度不呈线性关系。 * （2）定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准溶液测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度； 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，列比例计算即可。 * 3.荧光分析法的应用 (1)无机化合物的分析 与有机试剂形成配合物后测量，可测量20多种元素。 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定 (2)生物与有机化合物的分析 主要为具有共轭体系的芳香族化合物，见表。 * * 4、磷光分析法的应用 1.稠环芳烃分析 采取固体表面室温磷光分析法快速灵敏测定稠环芳烃和杂环化合物（致癌物质）；见表 2.农药、生物碱、植物生长激素的分析 烟碱、降烟碱、新烟碱等分析 检测限0.01 ?g/ml 3.药物分析和临床分析 见表 * * * 分子发光分析法教学要求 掌握分子荧光、磷光的产生机理； 掌握激发光谱和发射光谱特征。 掌握荧光与分子结构的关系以及溶液荧光（磷光）强度的影响因素。 了解荧光（磷光）分析法的特点。 了解荧光（磷光）分析仪器的结构。 * P99 以后的内