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第 七 章  手 性 色 谱 高效分离技术（HPLC） 高效手性分离技术 手性分离基本策略 7-1 手性色谱技术概述 ——采用手性衍生化试剂与手性胺类、醇类、羧酸类等反应形成非对映体衍生物。非对映体对在常规色谱系统中,根据非对映体分子的手性结构、手性中心所连接的基团、色谱系统的分离效率(包括溶质分子与固定相和溶剂之间的结合力,如氢键、偶极-偶极、电荷转移和疏水性等 )的不同,而差速迁移获得分离。 ＣＤＲ法的缺点 手性衍生化分离机制 对映体对在色谱系统中的差速迁移与下述因素有关： 2．直接法 手性流动相添加剂液相色谱法 CDs作用的基本原理 在含有CDs为流动相组分的反相系统中的复合与吸附平衡比较复杂，影响对映体拆分的因素主要有：① CD复合物稳定常数的差异；② CD复合物在疏水固定相表面吸附的差异；③ 溶质分子(对映体)与吸附在反相柱表面的CD层上的吸附程度的差异。 实例：β-CD拆分苯基琥珀酸 2).手性配合交换色谱法 3).手性离子对色谱法 HPLC-CMPA拆分对映体的机理大致可归纳为： (2)手性固定相液相色谱法 主要优缺点 优点是： ★能广泛适用于各类化合物，适于常规及生物样品的分析测定； ★除非必须衍生化，否则无需高光学纯度试剂； ★样品处理步骤简单。 ★制备分离方便，定量分析的可靠性较高； 缺点是： ★样品有时也须作柱前衍生（但不一定是手性衍生化试剂）， ★对样品结构有一定限制，其适用性尚不及普通HPLC固定相（包括正相和反相）那样广泛。 ★迄今为止，CSP柱商品已有40多种，价格大多昂贵，尚未有一种具有类似ODS柱的普遍适用性。 手性固定相与手性拆分机理 此类手性手性固定相化学结构的特点是手性中心附近至少含有下列一种官能团： ① π-吸电子或π-给电子的芳香基团（在手性识别过程中发生π-π电荷相互作用）； ②能形成氢键的原子或基团； ③能发生偶极-偶极相互作用的极性键和基团； ④能提供立体排斥、范德华相互作用和构型控制较大的非极性基团。 手性固定相与手性拆分机理 拆分机理 ——三点作用原理 在手性固定相与对映体的识别过程中，至少需要两个不同的力，使对两映体按照同一空间取向吸附在固定相上，而由于对映体空间构型的不同，使得第三个力（吸引力或排斥力）作用不同，导致吸附能的不同，得到不同的保留值而分开。 三点作用模型 色谱柱评价 色谱柱评价 7-4-2 蛋白质固定相 蛋白质类手性固定相应用范围较广，效果良好，但该类固定相的谱柱容量较小。常用洗脱系统是磷酸盐缓冲溶液（PH4～7），离子强度为 0～500mmol，有机改性剂不得超过 5% ——蛋白质怕有机溶剂。 7-4-3 纤维素和多糖衍主物手性固定相 拆分外消旋1-苯基乙醇类化合物 7-4-8/9 合成聚合物与分子烙印手性固定相 GC TLC CE手性拆分 气相手性色谱 早期的手性固定相多使用氨基酸、肽和各种他们的衍生物，后来也有使用其他的天然的手性分子如酒石酸、苹果酸、扁桃酸和菊酸，但是用环糊精衍生物制备的手性GC毛细管柱是最为成功的一类。 Armstrong 研究组在上世纪90年代初研究设计了一种既是液体又是极性的亲水性糊精衍生物，做GC手性固定相。制备成在室温下为液体、中等极性的 α-，β-，和γ-CD 的衍生物GC固定相。 O-((S)-2-羟丙基)-环糊精全甲基衍生物的制备 第一步：制备O-((S)-2-羟丙基)-环糊精首先把环糊精溶解在氢氧化钠水溶液（5% （w/w））中，并在冰浴中冷却，然后在搅拌下慢慢地加入（S）环氧丙烷，在冰浴中放置 6 h 以后，在室温下进行反应一天，之后进行中和，用渗析的方法除去其中的盐，把剩下的溶液过滤，冷冻干燥。第二步：制备混合O-((S)-2-羟丙基)-环糊精全甲基取代物把上述环糊精衍生物溶于氢氧化钠（50%在石蜡油中的悬浮物）中，在二甲基亚砜中以碘甲烷进行全甲基化处理。 用静态法涂渍成熔融石英毛细管色谱柱。 TLC分离芳香醇胺对映体 毛细管电泳手性色谱 2-HPA（N-(2-heptyl)propargylamine）是目前用于治疗神经退行性疾病的一种新型药物，主要应用于治疗帕金森（PD）和肌萎缩性侧索硬化（ASL）疾病的开发研究。研究采用丹磺酰氯柱前衍生化毛细管电泳进行2-HPA的拆分。 光气是“光成气”的简称，又叫碳酰氯，分子式COC12。光气是窒息性毒剂的一种，是一种毒性很强的气体 ，吸入后会引起肺部的纤维化，从而使支气管堵塞，产生肺水肿 CDI：N,N′-羰基双咪唑 常用的手性配合试剂多为氨基酸及其衍生物， 如L - 脯氨酸 、L -