哈茨木霉菌的抗药性诱变改良研究PPT.pptVIP

哈茨木霉菌的抗药性诱变改良研究 学院：农学院 班级：生物技术（本）072班 学号：2007150211 姓名：赵泽 指导老师：姚艳平 目录 研究背景 研究意义 研究目标 材料与方法 结果与分析 结论与讨论 致谢 研究背景 木霉菌的诱变方法 复合诱变 复合因子处理是指两种或两种以上的诱变因子诱发菌体突变。各种诱变因子的作用机制不一样，主要是DNA分子上的不同基因位点对各种诱变剂吸收峰值有较大差异，即不同诱变剂对基因作用位点有一定的专一性，有的甚至具有特异性，因此多因子复合处理，可以取长补短，改变DNA分子上多种基因的遗传稳定性，能导致较大的突变，得到更多的突变类型。 某一菌株长期使用诱变剂之后,除产生诱变剂“疲劳效应”外,还会引起菌种生长周期延长、孢子量减少、代谢减慢等,在实际生产中多采用几种诱变剂复合处理、交叉使用的方法进行菌株诱变。 复合诱变是指两种或多种诱变剂的先后使用，同一种诱变剂的重复作用和两种或多种诱变剂的同时使用。普遍认为,复合诱变具有协同效应。两种或两种以上诱变剂合理搭配使用复合诱变较单一诱变效果好。复合因子诱变较单一因子诱变在效果有很大优势。 研究意义 木霉菌由于本身属于真菌生物，对化学制剂的传统农药比较敏感，在大田作业时不能与传统化学药剂混施，无法达到生物防治和化学防治的双重效果，在农业生产中受到了许多的限制，成为将木霉菌这一生物防治手段运用到生产实践当中的巨大障碍。 研究目标 本文选取哈茨木霉作为实验材料，通过紫外线和含药平板复合诱变的方法，研究菌株诱变过程，探讨提高哈茨木霉抗药性的方法，分析影响其抗药性的因素，从而为木霉菌这一先进的生物防治手段运用到现代的农业生产中来，服务于农业，造福于农业的目标提供科学依据。 材料与方法 抗百菌清的哈茨木霉的诱变选育 百菌清对普通菌株及抗药性菌株的敏感度测定 抗药性哈茨木霉菌株的遗传性测定 抗药性菌株的生长速率与产孢能力测定 抗药性哈茨木霉对番茄灰霉病菌的拮抗性测定 结论 实验诱变出百菌清产生抗性的突菌株5株，亲本木霉菌株相比较,一些主要性状略有消减，但生长速率、产孢能力以及拮抗作用等均接近或较近于出发菌株，抗药性却高于亲本菌株，这无疑提供了对环境适应能力更强的生防木霉菌株，为木霉的生物制剂在田间应用时不受或少受杀菌剂的影响提供了可参考的依据，同时也为实现生物农药与化学农药综合协同作用提供了参考。 讨论 先单一将菌株进行紫外线诱变，即诱变时所用PDA培养基为无药培养基，然后再利用含药(百菌清)平板进行培养，不易得到诱变木霉突变菌株，而通过紫外线诱导和含药培养基培养相结合的方法却较易诱导产生诱变突变体。 前人试验结果显示，将菌株通过紫外线诱导和含药培养基驯化相结合的方法较易诱导产生抗药性突变体。但本实验采用的是紫外线诱导和化学诱变结合的方法，产生的诱变菌株第一代抗药性明显，但随着传代的增多，抗药性衰退明显。 物理诱变 木霉菌 复合诱变 化学诱变 生物诱变 抗药性菌株的生长速率与产孢能力测定 百菌清对普通菌株及抗药性菌株的敏感度测定 哈茨木霉菌的抗药性诱变改良 抗药性哈茨木霉菌株的遗传性测定 抗药性哈茨木霉对番茄灰霉病菌的拮抗性测定 抗百菌清的哈茨木霉的诱变选育 10min 复合诱变后菌落数统计 单位：个 20min 200 mg/kg 3 2 2 3 0 污染 250 mg/kg 1 0 污染 1 0 3 CK 生长旺盛 生长旺盛 10 8 菌落呈白绿色，体积较小、菌丝密实、呈毡状。 菌株 Th-200-10-C1 Y=1.1094X+1.9474 0.7387 113.4741 Th-200-10-B2 Y=1.6809X+3.1222 0.901 167.0853 Th-200-20-A2 Y=2.7818X+1.3223 0.9251 55.3489 Th-200-10-A1 Y=0.4032X+2.2392 1.0012 124.1194 Th-200-20-A1 Y=1.0738X+2.0633 1.053 127.142 出发菌株Th Y=2.8785X+1.2159 0.9114 61.8219 抗药性木霉菌的敏感性 R2 毒力方程 EC50 NF9-200-10-B2菌株的EC50为167.0853mg/kg，比出发菌株的抗药性提高了2.7倍。 Th-200-10-B2菌株的F3出现高抗药性，但F5代的生长抑制率又有所升高,其抗药性变化的机制还未明确。 抗药性菌株的生长速率与产孢能力 Th-200-20-A1 33.50 生长速率 Growth rate（mm/d） 产孢量 Spor usquantity(*109/ml) Th-