3抗心肌缺血药-新药研究.ppt

第三部分抗心肌缺血药 心肌缺血(Myocardial ischemia) 是指心脏的血液灌注减少，导致心肌缺氧，而不能支持心脏正常工作的一种病理状态。 引发心绞痛、心律失常、心功能不全、心肌梗死等。 常用抗心绞痛药 有机硝酸酯类：硝酸甘油 ?受体阻断药：普萘洛尔 钙拮抗药： 硝苯地平 维拉帕米 地尔硫卓 抗心肌缺血药研究内容 心肌缺血或梗塞模型 冠脉循环及血流动力学 一、心肌缺血或梗塞模型 整体实验 冠状动脉结扎法 药物法 离体实验 离体心脏灌流 心肌细胞培养 1. 冠状动脉结扎致心肌缺血或梗死模型 基本原理： 结扎动物的左冠状动脉引起急性局部心肌缺血或梗死。 实验动物: 大鼠、兔、猫、狗、猪、猴等。 1.1 犬结扎冠脉致急性心肌缺血模型 操作步骤: 犬麻醉、固定、手术，气管插管连呼吸机。 开胸：沿胸骨左缘第4或5肋间开胸，并用开胸器撑开。剪开心包膜，缝合于胸壁，成一摇篮状。 操作步骤: 犬麻醉、固定、手术，气管插管连呼吸机。 开胸：沿胸骨左缘第4或5肋间开胸，并用开胸器撑开。剪开心包膜，缝合于胸壁，成一摇篮状。 分离左冠脉前降支主干中下1/3处，记录正常指标。 结扎冠脉，观察各项指标的变化。 心电图 当冠状动脉大的分支痉挛或阻塞，可引起全心室壁有急性心肌缺血损伤，表现为ST段抬高。 ST段标测： ST段升高的电极数、 ST段升高值的总和 检测时间： 结扎前、结扎即刻、2、5、10、20、30、60、120、180min…… 结扎前后比较、组间比较 血流动力学指标 仪器设备： 电磁流量计、压力换能器、生理记录仪等 观测指标： 冠脉流量、心输出量、动脉血压、左室内压、左室舒张末压、左室内压最大变化速率、左室作功、总外周阻力、冠脉阻力、心脏指数、心搏指数等；心肌耗氧量或耗氧指数等 连续动态观测 血清学检测 心肌酶指标：磷酸肌酸激酶（CK、CK-MB）、 乳酸脱氢酶（LDH）、 谷草转氨酶（GOT ） 心肌代谢产物：乳酸、游离脂肪酸（FFA）、 Na+-K+-ATP酶 自由基代谢产物：MDA、SOD、NO 钾、钙等 大体标本形态学染色 基本原理： 正常心肌细胞 NBT NADH 蓝色 TTC 脱氢酶 红色 而梗死心肌不染色 硝基四氮唑蓝(nitroblue tetrazolium, NBT) 氯化三苯基四氮唑 / 红四氮唑 (triphenyl tetrazolium chloride, TTC) 步骤： 取心脏，盐水冲洗，滤纸蘸干。 切心肌片，冠状切5片。 步骤： 取心脏，盐水冲洗，滤纸蘸干。 切心肌片，冠状切5片。 染色：1%TTC，37℃约10min。 染色停止，盐水冲洗，蘸干，照相。 步骤： 取心脏，盐水冲洗，滤纸蘸干。 切心肌片，冠状切5片。 染色：1%TTC，37℃约10min。 染色停止，盐水冲洗，蘸干，照相。 计算心肌梗死面积比（%） =未染色面积和 / 心肌片总面积和 ? 100% [方法评价] 简便快速易行、准确实用，国际常用并公认的方法 适用于较大心脏，对于大鼠等小动物的心脏误差较大 结扎冠脉3~6h后即可检测 心脏可冰冻，无需完全融化 染料配制：pH7.4的0.2M的Tris或磷酸缓冲液 染色充分，完全浸没，时间不宜过长或过短 组织形态学改变 光学显微镜下或电子显微镜下的定量组织学观察 固定——脱水——包埋——切片——染色 模型特点： 在结扎冠脉后动物血流动力学和心肌代谢的改变与冠心病人严重心肌缺血及梗死时有某些相似之处。 梗死发生快，缺血的范围大致固定，并可进行动力学、心电图ST段标测、组织染色检查和血清酶学等综合指标测定，确定心肌缺血或梗死范围和损伤程度。 1.2 大鼠冠脉结扎致心肌缺血模型 SD大鼠，雄性，250~300g 可连接呼吸机，也可不用，但须注意排气 结扎左冠状动脉 指标：心电图、血生化指标、大体形态学染色 急性、亚急性（消毒、抗生素） 简便易行，但大鼠侧枝循环丰富，变异性较大 一、心肌缺血或梗塞模型 整体实验 冠状动脉结扎法 药物法：麦角新碱、垂体后叶素、