痰瘀共治对大鼠动脉粥样硬化斑块影响及其可能机制.docVIP

痰瘀共治对大鼠动脉粥样硬化斑块影响及其可能机制 　　摘要：目的：探讨痰瘀共治方对大鼠动脉粥样硬化(ather06clerosis，AS)斑块的影响及其可能机制。方法：12周龄雄性Wistar大鼠85只。随机分为5组：①正常组(the control group，C，n=20)，②模型组(the model group，M，n=20)，③罗格列酮组(the Rosiglitazone group，RSG，n=15)，④痰瘀共治低剂量组(TYD，n=15)。⑤痰瘀共治高剂量组(TYG，n=15)。采用高脂饲料喂饲法加雏生素D3负荷法复制大鼠AS模型，6周后取C组及M组大鼠各5只，以主动脉HE染色切片发现AS斑块作为造模成功指标。造模成功后除正常组喂饲基础饲料，余组继续喂饲高脂饲料，并分别加予生理盐水[10mL/(kg?d)]、罗格列酮(3mg/kg)、痰瘀共治方流浸膏高剂量(0.8g/mL)、痰瘀共治方流浸膏低剂量(1.6g/mL)灌胃治疗6周后处死，HE染色观察大鼠主动脉形态学变化，免疫组织化学染色法观察主动脉过氧化物酶体增值物激活受体γ(PPARγ)蛋白表达的变化，??检测空腹血糖(fasting plasma glucose，FPG)、空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)，计算胰岛素抵抗指数(HOMA－IR)。结果：高脂饮食加维生素D3负荷6周后造模成功。光镜下观察可见主动脉典型的粥样硬化斑块；灌胃治疗6周后，与M组比。各治疗组大鼠FPG、FISN、HOMA－IR水平均降低(p＜0.05或P＜0.01)，HE染色见斑块明显消退，PPARγ蛋白表达平均光密度值明显减弱。以TYG组(1.08±0.03)作用显著(p=0.0025)，低于TYD组(2.84±0.07)(p=0.034)，与RSG组(1.12±0.05)比差异亦没有统计学意义(P=0.427)，同时各治疗组与c组比差异没有统计学意义(p＞0.05)。结论：痰瘀共治方可能通过激活PPARγ，改善胰岛素抵抗起到抗动脉粥样硬化的作用。 　　关键词：痰瘀共治；动脉粥样硬化；大鼠；过氧化物酶体增殖物激活受体γ 　　中图分类号：R－33　文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)07－1466－04 　　 　　动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是心脑血管病发生的最主要原因，最近研究显示，核转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxlsome prollferator activated receptor－γ，PPARγ)参与了血管壁炎症反应和AS发生发展的调控，但对其在AS形成中的具体机制尚存较多争议。胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)是AS的重要危险因素，是产生“痰浊”和由“痰”致“瘀”，终致“痰瘀痹阻”的共同土壤，本研究采用痰瘀共治方法治疗AS模型大鼠，观察其对大鼠AS斑块的作用及可能机制。 　　 　　1　材料 　　 　　1．1　动物　12周龄雄性Wistar大鼠85只，体重(250±10)g，购自复旦大学实验动物科学部，按纯系动物要求专人饲养于浙江中医药大学动物实验中心清洁级动物房。 　　1．2　主要试剂及仪器　胆固醇(分析纯)(上海伯奥生物科技有限公司)、胆酸钠(上海源聚生物科技有限公司)、丙基硫氧嘧啶为(南通制药总厂)、维生素D3注射液(上海通用药业股份有限公司)、PPARγ－抗(sc－7273)(Santa Cruz公司)、Envision二抗(Darko公司)、DBA显色剂(北京中杉公司)、胰岛素放射免疫分析试剂盒(北京北方生物技术研究所)、SSOOPP半自动生化分析仪(法国Secomam公司)、高速台式冷冻离心机(德国Eppendorf公司)。 　　 　　2　方法 　　 　　2．1　造模方法　对照组喂食基础饲料(其中面粉20％，米粉2％，玉米20％，麸皮25％，豆料20％，骨粉2％，鱼粉2％)，实验组喂食高脂饲料，即3％胆固醇、0.5％胆酸钠、0.2％丙基硫氧嘧啶、5％白糖、10％猪油、81.3％基础饲料，同时在喂食开始时一次性腹腔注射维生素D340万IU/kg，对照组给予同等体积的生理盐水。 　　2．2　分组及给药方法　参照随机数字表将12周龄雄性Wistar大鼠85只，随机分为5组：①正常对照组(the Control group，C，n=20)：喂食基础饲料6周后处死5只检测，余15只继续喂食基础饲料6周；②模型组(the Modelgroup，M，n=20)：喂食高脂饲料6周后处死5只检测，余15只继续喂食高脂饲料，并加予生理盐水[10mL/(kg?d)]灌胃6周；③罗格列酮组(the Rosiglitasone group，RSG，n=15)；