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关注细节 回归教材 ---选修三复习 案例1 2013年12月湖南、广东、四川等地的婴儿在接种了某乙肝疫苗后出现死亡病例。疫苗的安全性又重新被讨论。 1986年，第一个基因工程疫苗研制成功--乙肝疫苗。目前我国市场上的乙肝疫苗基本都是基因工程疫苗。 关注教材 选修三 基因工程，细胞工程，胚胎工程 必修三 植物激素调节，动物神经调节，体液调节，种群特征，生态能量流动 必修二 变异，育种 必修一 细胞结构和生命历程 * 问题： 基因工程 1基因工程技术的核心是什么？ P1 基因工程的核心是构建重组DNA分子，早期也将基因工程称为重组DNA技术。 2乙肝疫苗的基因是什么呢？真正起保护机体的免疫作用的是什么？ 乙肝表面抗原基因 抗体，记忆细胞 请判断： 基因工程的基本原理是DNA具有双螺旋结构以及遗传信息方式的认定。 基因工程的基本原理：P5 基因工程的理论基础：P2 × 1983年科学家将乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因片段导入到大肠杆菌中并成功表达，乙肝表面抗原蛋白可被放射免疫分析和蛋白凝胶电泳所检测。 基因工程 问题： 1目前关于乙肝病毒的研究已经非常深入，怎么获得大量的目的基因呢？ 2假设现在要求研发流感病毒疫苗，你又如何得到目的基因呢？ P5 反转录法 3你会选择什么载体将目的基因导入大肠杆菌呢？ 4 噬菌体，如λ噬菌体，T2噬菌体均能作为基因工程的载体吗？ P4 T2噬菌体：致命性（烈性）噬菌体，专门感染大肠杆菌。一旦侵入，短时间内完成吸附、侵入、增殖、组装和裂解。 存在问题：人们发现大肠杆菌表达的蛋白没有活性。 如何解决？ 基因工程 思考： 原因： 真核细胞蛋白质分泌加工系统 1 同理P6页，人胰岛素原需要进一步可获得具有生物活性的原因是否也是一样呢？ 真核细胞基因表达系统和蛋白质分泌加工系统 a组成乙肝表面抗原的氨基酸226个，指导其合成的mRNA中的碱基大于678个，其原因是________________________________________________。 b 胰岛素基因刚转录出来的mRNA中的碱基数有1008个，翻译合成的蛋白质中氨基酸只有51个，其原因主要是_____________________________。 mRNA中存在终止密码子等不编码氨基酸的序列 刚转录的mRNA需进一步加工至成熟mRNA才用于蛋白质合成。 请判断： 1质粒只能在原核细胞中稳定的复制和表达。 2用Ca2+处理酵母菌细胞有利于重组DNA的导入。 3可利用标记基因筛选含重组DNA的受体细胞。 4标记基因能表达的细胞就是含重组DNA的受体细胞。 转入酵母菌 × × √ × 最接近天然疫苗的是动物细胞产生的。现在最成功的是将编码乙肝病毒表面抗原（HBsAg）的基因转入到CHO（中国仓鼠卵巢细胞）， CHO细胞属哺乳动物细胞类，它是基因工程表达系统中最高等的宿生细胞。 动物细胞培养 1CHO细胞具有不死性细胞，如何从普通的卵巢细胞中获得CHO细胞株呢？ 2 你还能用哪些词语来描述不死性细胞吗？ 细胞克隆 理解：细胞克隆的最主要用途之一是______________。 问题： 异倍体核型，转化细胞系，有接触抑制，有贴壁生长现象，连续细胞系 细胞克隆是获得细胞株的一种方法。 未经克隆的细胞系，具有异质性，经过克隆的细胞称为纯系。 【选择题1】研究转基因动物细胞，首先获得动物细胞纯系，建立起成熟的培养体系，才能实现大规模生产。CHO细胞具有不死性，可以传代百代以上。下列有关动物细胞培养说法正确的是 A 动物组织培养伴随组织分化，长期的培养经常只能使单一类型细胞保存下来。 B 细胞系一般具有恒定的染色体组型，同工酶类型，病毒敏感型和生化特性。 C 为提高克隆率，一般需要用紫外线处理致死的小鼠成纤维细胞作为滋养细胞支持生长。 D 原代培养中，普通细胞会出现停止增殖现象，CHO不死性细胞则可以正常连续分裂 随堂练一练 P28：注意细胞培养和组织培养的描述 细胞株的概念 失去增殖能力，但仍是活细胞，分泌某些物质 都不能正常生长，原因？ √ 动物细胞培养中的易混淆概念 二倍体 异倍体 异质性 细胞系 细胞株 细胞培养 组织培养 细胞克隆 原代培养 传代培养 癌细胞 不死细胞 连续细胞系 滋养细胞 饲养层细胞 滋养层细胞 细胞克隆主要用途 细胞融合主要用途 转化细胞 卵细胞 核移植 重组细胞 显微注射 胚胎体外培养 胚胎移植 显微注射到囊胚中再移植 A B 部分细胞转基因（嵌合体） 转基因动物 问：一般选择未受精的去核卵细胞作为核移植的受体，而不用普通的去核