开封地区烟粉虱生物型的分子检测.ppt

四、工艺路线 五、实验步骤 1 材料的准备 将蟹壳洗净、烘干，并研磨至d 2 mm的粉末状 2 浸泡，除钙质 称取干净的蟹壳25g，放置于1000ml的烧杯中，将375ml的5%的盐酸溶液缓缓地加入到烧杯中，并不断地搅拌，后室温（20℃）浸泡24 h，以充分除去蟹壳中的钙质。后去上清，水洗沉淀3次至中性； 3 去蛋白 加3％的NaOH溶液375ml于上述沉淀中，煮沸4～6 h或室温放置10 h，并不断搅拌，以除去蛋白质。后去上清，并水洗沉淀3次，以除去残留的碱及蛋白质； 4 氧化脱色 用0.5‰的KMnO4溶液10ml，搅拌浸泡沉淀1 h，再用1％的HNO3溶液10 ml于60～70℃水浴30～40 min至脱色； 5 去上清，得白色产品，水洗，干燥即可。 实验四 芦丁的提取与鉴定 一、目的要求 ⑴了解芦丁的提取制备原理； ⑵掌握不同的提取分离方法； ⑶掌握芦丁的鉴别方法。 二、实验原理 槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾，自古用作止血药物。治疗吐血，痔疮便血、子宫出血、鼻血等症，所含主要成分为芸香苷，又称芦丁（Rutin，维生素P），其含量高达12～16%，有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。 三、实验器材 试剂：硼砂，槐花，石灰乳，蒸馏水，正丁醇，醋酸，乙醇，三氯化铝，α-萘酚，浓硫酸，镁粉，盐酸，羧甲基纤维素钠，硅胶等 仪器：烧杯，滤纸，纱布，电炉，圆底烧瓶，三角烧瓶，玻璃棒，电子天平，抽滤瓶，布氏漏斗，紫外分析仪，试管，冰箱等 四、实验步骤 1. 水提取法 称取槐花米粗粉（20g），在500ml烧杯中加入水250ml，加热30min，补充失去的水分，用4层纱布趁热过滤，滤渣重复提取一次。合并滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后减压抽滤，用去离子水洗芦丁结晶，抽干，放置空气中自然风干得粗芦丁，称重。 2. 碱提酸沉法 称取槐花米粗粉（20g），在500ml烧杯中加入水250ml，硼砂1g[注1]在加热至沸腾时，投入槐花米，继续直火煮沸2～3分钟，在搅拌下小心加入石灰乳，调至8.5～9[注2]保持微沸30分钟，趁热用尼龙布挤过滤，取滤液。 滤液在60～70℃下用浓盐酸调pH至4[注3]，静置6小时以上析出沉淀。抽滤，用水洗3-4次，放置空气中自然风干得粗芦丁，称重。 注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。 注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。 注3：pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。 3. 芦丁的精制 取静置物抽滤, 用蒸馏水洗沉淀1～2次至中性，滤液弃去，沉淀即为芦丁粗品。粗品粗称重后按芦丁在热水中1：200的溶解度加蒸馏水进行重结晶。将沉淀悬浮于蒸馏水中，加热煮沸15分钟，趁热过滤。弃去残渣，滤液充分静置析晶，抽滤，60-70℃干燥，称重得芦丁精品。 4. 黄酮苷的鉴别 取芦丁少量于试管中，加乙醇10ml，在水浴上加热溶解。 ①盐酸-镁粉反应：取芦丁液2ml，加浓盐酸2～3滴及镁粉少量，放置（或于水浴中微热），产生红色反应。 ②取芦丁液1ml，滴加PbAC2溶液数滴，产生黄色沉淀。 ③纸片法： 将芦丁液滴于滤纸上喷以3%FeCl3乙醇溶液，出现亮黄、绿、兰或棕色斑点。 5.芦丁的纸色谱鉴定 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5）上层溶液，喷三氯化铝前后，置日光及紫外（365nm）灯检观察色斑的变化。 五、结果与分析 1.记录实验条件、现象、图谱、斑点颜色、各试剂用量及其产品芦丁的重量。 2.计算芦丁的理论产量和实际得率。 实验五 发酵法生产丝氨酸及鉴定 一、实验目的 1、学习丝氨酸的制备方法 2、掌握丝氨酸鉴定的方法 二、实验原理 一般直接发酵法生产丝氨酸的是细菌，由于丝氨酸处于氨基酸代谢的中间位置，直接发酵法得到丝氨酸的产量较低。工业生产中一般采用前体发酵法等，本实验主要是验证性实验。纸上（薄板）层析法通过选用合适的层析剂，在一定的时间内，把不同种的氨基酸分离开来，然后根据 Rf值以及不同氨基酸同吲哚醌显色后的颜色差别来对氨基酸进行定性测定。如果用茚三酮作显色剂，通过剪纸比色法，也可对氨基酸进行定量测定。它的原理与分配柱层析相同，所不同的是以滤纸作为支持剂。纸上层析以滤纸上的结合水作为固定相，以与水不相混溶的溶剂作为流动相。展开时，溶剂在滤纸上流动，样品中各物质在两相中不断进行分配，即发生一系列连续不断的抽提作用。由