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提取动物组织DNA的方法比较 本文采集自网络，本站发布的论文均是优质论文，供学习和研究使用，文中立场与本网站无关，版权和著作权归原作者所有，如有不愿意被转载的情况，请通知我们删除已转载的信息。 　摘 要：传统方式提取DNA大多运用氯仿、苯酚以及异丙醇等其它相关的试剂，此提取DNA的方式纯度相对而言比较低，实验过程非常的复杂、耗时之多，并且还有可能产生毒性的物质。所以，运用商品化的试剂盒针对DNA进行提取，显得更加的简洁、便利，其成本开支相对介绍。本文首先介绍了试剂盒提取DNA方法的相关内容，并以两种动物组织DNA提取方法的比较为具体的案例进行分析。 中国论文网 /8/view-8341995.htm 　　关键词：DNA提取试剂盒；DNA；改进 　　1 动物基因组DNA提取的方法 　　1.1 损伤性取样材料DNA的提取 　　1.1.1 乙醇保存的动物标本基因组DNA提取方式 　　用乙醇保存动物标本是最为常见、效果最好的方式。因为大部分的DNA酶必须具备某个二价阳离子当作辅助的因子（例如：Ca2+、Mg2+等），在70%的乙醇里面倒入合适数量的EDTA， EDTA能够在较短的时间内调控住DNA酶的活性，从而避免DNA所发生的的降解。莫邦辉等人在酒精标本DNA模板迅速提取里面并未运用蛋白酶K，单单是在缓冲液（0.5% SDS， 10mmol/L Tris-HCl，100mmol/LEDTA， pH 8.0）， 37℃温浴1h之后消化相关的材料，同样得到了比较好的扩增效果，然而这样的方式只能够运用片段比较短的PCR扩增中去。通常而言，使用酒精标本提取DNA的方式均会加入一定量的蛋白酶K，同时56℃的温度之下消化8～ 14h，以使得组织里面所含有的蛋白质全部消化。 　　1.1.2 甲醛溶液保存的动物基因组DNA提取方式 　　在之前所进行的探索里面针对福尔马林标本的DNA提取方式做出了非常大的改善，在标本的预先处理过程中，主要有临界点干燥与梯度酒精浸泡这两种不同的形式。然而梯度酒精浸泡的方式造成乙醇和标本里面的甲醛发成反应形成缩醛与半缩醛等，接着经过酒精变换被过滤出去。徐来祥等人为了避免标本吸入较多的水分而导致细胞被损害，运用PBS溶液融合乙醇溶液对样品进行浸泡、洗脱，同样获得了比较好的成果。在针对DNA进行提取的环节里面，周美玉与杜世章等人均均采取了抗氧化剂二硫苏糖醇（DTT），DTT可以非常好的避免甲醛氧化成甲酸，然而甲酸同样会导致DNA出现降解，所以抗氧化剂的通入对于DNA的提取有着非常重要的意义。 　　1.2 非损伤性取样材料DNA的提取 　　1.2.1 从毛发里面提取DNA的方式 　　?拿?发里面获得DNA，与其有关的报道非常之多。余舰等人在蛋白酶K的作用之下，运用酚-氯仿反复抽提的形式便已由毛发里面获得极少数的DNA。徐艳春与伍新尧等人采取Chelex-100处理毛发提取DNA，然而运用这样的方式对于毛囊细胞的裂解并不充分，所遗留的消化液对于之后所进行的PCR实验有非常的负面影响。之后，李军林等人以普通的酚-氯仿提取方式为基础进行改善，以pH 8.8Tris-HCl、MgCl2溶液与蛋白酶K作为裂解液进行消化，得到了品质比较高的DNA。 　　1.2.2 从血液样本里面提取DNA的方式 　　从血液里面取得DNA最为重要的便是清除掉里面所含有的蛋白质与红细胞等其它物质。通常所采取的方式为：首先获得淋巴细胞，接着运用蛋白酶K、SDS进行消化，接着采取酚氯仿抽提进行提取、使用乙醇进行沉淀。然而这样的方式比较繁琐，同时所使用的试剂对于人们的健康有着较大的影响，因此有大量的专业人士对其作出了改善。赵权等人运用TritonX-100来对白细胞与红细胞进行破碎，直接获得白细胞核，接着运用NaClO4， SDS分解聚核蛋白，然而并未运用蛋白酶K，最终运用PCl（酚∶氯仿∶异戊醇25∶24∶1）进行抽提，使用乙醇进行最后的沉淀。这样的方式能够更加好的去除红细胞。 　　2 试剂盒提取DNA的步骤 　　开展试验之前所需要注意的几点内容： 　　1、首次运用之前需要根据试剂瓶外所贴的标签指示首先在漂洗液PW与缓冲液GD里面倒入适量的无水乙醇。 　　2、所选取的样品需要防止重复此能够的冷冻与溶化，不然会造成所提取出的DNA片段相对较小，提取的数量减低。 　　3、如果缓冲液GB或者GA里面有沉淀物，能够将其置入56℃的水浴里面再次溶解，摇匀之后继续运用。 　　4、全部的离心过程都需要运用台式的离心机，在室温背景下进行离心。 　　具体的操作步骤： 　　1.处理相关的材料： 　　a、如果所提取的材料是血