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三种小麦蛋白质测定方法比较 　　摘要：为比较不同小麦蛋白质测定方法，总结各方法的特点和适用条件，该试验用凯氏定氮法、近红外透射光谱分析法和考马斯亮蓝染色法分别对１４个小麦品种进行蛋白质含量的测定。结果显示，三种方法都能测定出各材料的蛋白质含量，在９５％置信区间，凯氏定氮法和近红外透射光谱分析法测定值与常年平均值之间存在线性关系，三者测定结果之间没有显著差异。 　　关键词：凯氏定氮法；近红外透射光谱分析法；考马斯亮蓝染色；蛋白质；测定 　　中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｓ３３１文献标志码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2533-03 　　 　　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ 3 Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｏｗａｒｄｓ Pｒｏｔｅｉｎ ｉｎ Ｗｈｅａｔ 　　 　　ＪＩ Ｙｕ－ｍｅｉ 　　（Ｈｅｂｉ Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ ＆ Ｔｅｃｈｎｉｃａ?? Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｈｅｂｉ ４５８０３０， Ｈｅｎａｎ， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔhe ｔｈｒｅｅ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｋｊｅｌｄａｈｌ， nｅａｒ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｔｒａｎｓｍｉｔｔａｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ （ＮＩＴＳ） ａｎｄ Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ， ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ 14 kinds of ｗｈｅａｔ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｌｌ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｆｅａｓｉｂｌｅ， ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ａｎｎｕａｌ ｖａｌｕｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ Ｋｊｅｌｄａｈｌ ａｎｄ ｎｅａｒ ｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ ｔｈｅ ９５％ ｃｏｎｆｉｄｅｎｃｅ ｉｎｔｅｒｖａｌ was linear． Ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Kｊｅｌｄａｈｌ； ＮＩＴＳ； Cｏｏｍａｓｓｉｅ bｒｉｌｌｉａｎｔ bｌｕｅ； ｐｒｏｔｅｉｎ； ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 　　 　　小麦作为重要的农作物，其品质差异可显著影响其经济价值。蛋白质含量是衡量小麦加工品质的重要指标，通常采用具有较高准确度和精密度的用凯氏定氮法来测定［１－２］，但该法费时费工，其使用的试剂为强酸强碱，对环境污染较大［３－４］。近年来，近红外透射光谱技术已广泛应用于谷物子粒的品质分析和育种筛选［５－６］，例如：瑞典Ｐｅｒｔｅｎ公司的ＤＡ７２００近红外仪能在天然物理状态下，对谷物实现快速无损地定性定量分析［７］；考马斯亮蓝染色法是经典的蛋白质测定方法，通过测定５９５ ｎｍ处光吸收的增加量来计算与染料结合的蛋白质量，具有反应快、灵敏度高的优点［８］。本试验通过分析比较凯氏定氮法、近红外透射光谱分析法和考马斯亮蓝染色法测定小麦中的蛋白质含量，确定各种方法的适用条件，为探索小麦育种早期材料的蛋白质测定提供有效分析方法。 　　１材料和方法 　　１．１材料 　　选择蛋白质含量差异分布较大的１４个小麦品种，包括：轮选９８７、轮选３２６、轮选２０９、轮选９７９、新１１试管株、新麦１１、豫麦４７、豫麦３４、罗夫林、杨麦１３、杨麦００１－１８、周麦１６、百农３２１７和百农矮抗５８。 　　本实验所用试剂均为分析纯试剂，实验用水为去离子水。 　　凯氏定氮法使用试剂包括：硫酸钾、硫酸铜、硫酸、２０ ｇ／Ｌ硼酸溶液、４００ ｇ／Ｌ氢氧化钠溶液，０．０５ ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ标准溶液，１ ｇ／Ｌ甲基红乙醇溶液，１ ｇ／Ｌ亚甲基蓝乙醇溶液和１ ｇ／Ｌ溴甲酚绿乙醇溶液。临用前配制２份甲基红乙醇溶液与１份亚甲基蓝乙醇溶液混合指示液。 　　考马斯亮蓝溶液：称取０．１０ ｇ考马斯亮蓝Ｇ２５０，溶于５０ ｍＬ ９５％（Ｖ／Ｖ）乙醇后，加入１００ ｍＬ ８５％（Ｖ／Ｖ）磷酸，并用去离子水稀释至１ ０００ ｍＬ，滤纸过滤，待用。２０ ｇ／Ｌ氯化钠溶液，５ ｇ／Ｌ氢氧化钠溶液，７０％（Ｖ／Ｖ）乙醇溶液。 　　１．２方法 　　所有材料种植在本单位试验田，正常收获、测产、脱粒和保存，采用四分法选取各品种的实验材料。每个样品设平行样３个，结果取平均值计算。通过ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ １７．０软件进行相关性分析。 　　１．２．１凯氏定氮法测定蛋白