五羟色胺和褪黑素对红细胞悬浮液粘度及红细胞形状影响.docVIP

五羟色胺和褪黑素对红细胞悬浮液粘度及红细胞形状影响 　　摘　要：探讨五羟色胺(5-HT，serotonin)和褪黑素(melatonin)对红细胞悬浮液粘度及红细胞形状的影响。建立五羟色胺温育的红细胞―血浆体系、红细胞-HEPES缓冲溶液体系及褪黑素温育的红细胞-血浆体系、红细胞－HEPKS缓冲溶液体系；观察各体系中红细胞悬浮液粘度的改变及其形态变化。用正常的红细胞悬浮液作对照进行比较时发现，五羟色胺和褪黑素温育后的红细胞悬浮液粘度显著下降；五羟色胺温育后的红细胞形状呈梭形，而褪黑素温育后的红细胞形状变化不明显。结果提示：神经内分泌系统对血液粘度有直接影响。这对于揭示血瘀症的分子本质和人体在多种生理及病理状态下的血液流变学异常提供了实验依据。 　　关键词：五羟色胺；褪黑素；血液粘度；红细胞形态；血瘀症 　　中图分类号：Q591．5 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847(2006)02-0118-05 　　五羟色胺和褪黑素是体内两种重要的激素，本实验室研究曾表明褪黑素是体内一种高效的氧自由基／羰基清除剂，而氧化和羰基紧张能造成红细胞悬浮液粘度上升，本实验旨在探索五羟色胺和褪黑素对血液粘度和红细胞形状的影响，并探讨其可能的作用机理。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1　试剂与仪器 　　褪黑素由美国Sigma公司提供；五羟色胺购于瑞士Fluka公司；羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)购自上海生工生物工程有限公司；DV-Ⅲ锥板式粘度计为美国Brookfield公司生产；BX51-TF荧光显微镜由日本Olympus公司生产。 　　1．2　血液样品 　　新鲜红细胞、血浆(1．5 g／L肝素钠抗凝)购于长沙市血液中心。每次实验所用血浆和红细胞均采用同一种血型，以减少不同血型对红细胞聚集性的影响。红细胞的压积用HEPES缓冲液稀释，严格控制在40％，以接近正常生理状态下人血液中的红细胞压积。 　　1．3　褪黑素和五羟色胺的配制 　　称0．212g五羟色胺(C10H12N2O?HClMr212．68)用HEPES缓冲溶液溶解定容至10mL配制成1×10-1mol／L储备液，储存于0～4℃备用。用五羟色胺储备液稀释成不同的浓度加入血液样品中使其最终浓度分别控制在2×10-8、1×10-7、2×10-7和2×10-6mol／L。取0．116g褪黑素(C13H16N2O2Mr232．16)溶解于1．0 mL分析纯乙醇中，然后用HEPES缓冲溶液定容至50mL，得到1×10-2mol／L储备液，储存于0～4℃备用。用褪黑素储备液稀释成不同的浓度，加入血液样品中使其最终浓度分别控制在2×10-8、8×10-8、2×10-7和2×10-6mol／L。 　　1．4 血液粘度的测定及塑性粘度的计算 　　将红细胞分别置于血浆和HEPES缓冲溶液中，加入不同浓度的褪黑素和五羟色胺，于37℃水浴30min。对不同浓度的褪黑素和五羟色胺温育后的红细胞悬浮液用DV―Ⅲ锥板式粘度计测定不同剪切率(100―400 s-1)下的表观粘度，由Rheocalc 32软件自动记录。每一组剪切率下的塑性粘度由同一软件的Casson方程计算给出。 　　1．5 红细胞形态学观察 　　将不同浓度的褪黑素和五羟色胺温育后的血浆－红细胞和HEPES―红细胞悬浮液制成涂片，用荧光显微镜观察红细胞形状的变化。结果显示五羟色胺在2×10-8mol／L和褪黑素在8×10-8mol／L时的红细胞形状变化图，其余浓度的变化与这两个浓度相同。 　　1．6 统计学方法 　　所有数据以均数和标准差(means±s．d．)表示，两样本比较采用成组t检验． 　　 　　2　结果 　　 　　2．1 血液流变学指标的改变 　　测定五羟色胺温育的红细胞―血浆体系的粘度表明，不同剪切率下的表观粘度的平均数随着浓度的升高而降低(图1A)，跟对照比较T值随着浓度的升高而增加(表1)．塑性粘度在浓度为2×10-8mol／L时，处理组比对照组有显著地降低(t=4．24，P-7mol／L和2×10-7mol／L两个浓度与对照处理的差异不显著；浓度为2×106mol／L时，有高度显著地降低(t=143．75，P-8mol／L以外，其它浓度处理均高度显著地低于对照(图2A)；同样，塑性粘度除了浓度为2x10-8mol／L以外，其它浓度处理均显著或高度显著地低于对照(图2C、表2)；褪黑素温育的红细胞-HEPES缓冲溶液体系的表观粘度除了最高浓度2×10-6mol／L达到高度显著水平以外，其余的3个低浓度均无显著差异(图2B、表2)。 　　 　　 　　2.2　红细胞形态学改变观察经五羟色胺温育后的红细胞－HEPES缓冲溶液体系中的红细胞，发现红细胞的形状变为梭形