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人IL-32α二级结构及B细胞表位预测 　　摘　要：以人IL-32α的氨基酸序列为基础，采用SOPMA法预测IL-32α的二级结构：应用ProScale、Bcepred服务器和EMBOSS软件，分析人IL-32α亲水性、柔韧性、可及性和抗原性指数，并结合二级结构特征，预测IL-32α的月细胞表位，结果显示：IL-32α的二级结构由α螺旋(61.07％)和无规卷曲(38.93％)组成；其B细胞表位可能位于N端第87～94、102～108、121～127区段，预测结果将有助于确定IL-32α的B细胞表位，为研制抗人IL-32单克隆抗体提供了理论依据。 　　关键词：IL-32：B细胞表位；二级结构 　　中图分类号：R392.11　文献标识码：A　文章编号：1007-7847(2007)04-0352-03 　　 　　IL-32(Interlcukin-32)是最近发现的前炎性细胞因子，主要由丝裂原活化的淋巴细胞、IFN-r活化的上皮细胞和单核细胞以及IL-12、IL-18和IL-32活化的NK细胞分泌，尽管IL-32与已知的细胞因子家族之间缺乏序列同源性，但却通过活化NF-kB和p38 MAPK途径刺激TNF-α、IL-α、IL-1β IL-6和IL-8等多种细胞因子和趋化因子的产生，进而放大炎症反应，临床研究显示：类风湿关节炎患者关节滑膜中IL-32的表达明显增高，并且与疾病的严重性相关：在炎性肠病(Innammatory bOWe]disease.IBD)患者的粘膜上皮也发现了 mRNA的过表达，IL-32有4个剪切突变体IL-32α、IL-32β、IL-32r和IL-32δ，其中IL-32α是分布最为广泛的形式，本研究根据人IL-32α基因推导的氨基酸序列，利用分子生物学软件，分析IL-32α的B细胞优势表位，为研制抗IL-32α单克隆抗体提供理论依据。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1　IL-32α的一级序列 　　　人IL-32α的一级序列由NCBI提供的蛋白质数据库获得(NP_001012651)，序列如下： 　　　 　　1．2　人IL-32α二级结构的预测 　　采用SOPMA(http://npsa-pbil.ibcp.fr/cgi-bin/npsa_automat.pl?page)预测IL-32α的二级结构。 　　 　　1．3　人IL-32α亲水性、可及性、柔韧性参数及抗原位点的预测 　　按Hopp Woods亲水性方案预测亲水性、按Bhaskaran-Ponnuswamy方案预测柔韧性(www.省略/tools/protscale.html)；按Emini方案预测可及性(www.imtech.res.in/raghava/bceored/bceoredsubmission.html)；用EMBOSS软件分析抗原位点(http://liv.bmc.uu.se/cgi-bin/emboss/antigenic)，然后综合各分析方法，取各结果的重叠区域，即为可能的B细胞优势表位。 　　 　　2　结果 　　 　　2．1　人IL-32α的二级结构预测 　　通过SOPMA预测的二级结构见图1 　　 　　结果显示，IL-32α的二级结构由α螺旋(61.07％)和无规卷曲(38.93％)组成。无规卷曲集中分布在C端，位于81～102和107～131位氨基酸。 　　 　　2．2 IL-32α β细胞表位的单参数预测 　　根据Hopp＆Woods的氨基酸亲水性标准分析人IL-32α的亲水性区域，预测结果见图2，亲水性高的区域位于6～19、22～38、44～55、62～68和72～128位氨基酸，柔韧性和可及性预测结果见图3、图4，柔韧性较高的区域为32～40，49～55，73～128位氨基酸，IL-32α中可及性较高的区域位于6～37、45～55、60～128，用EMBOSS软件分析显示，4～9、40～45、55～64、67～74、87～94、102～108、121～127为可能的B细胞表位，表1为各参数预测的结果。 　　尽管不同参数预测的B细胞表位的位置不尽相同，但87～94、102～108、121～127肽段用多种参数分析得到了基本一致的结果，这些肽段具有较高的亲水性，在二级结构上位于或富含无规卷曲。符合表位分布的特点，并且与抗原性参数和可及性参数预测的结果也相符，可能为IL-32α的B细胞优势表位。 　　　 　　　 　　3　讨论 　　 　　在蛋白质B细胞??位的预测中，HoppWoods亲水性方案是最常用和最成功的方法，但表位形成是多种因素综合作用的结果，单参数预测的准确率较低，因此，还需要将亲水性与二级结构、可及性、抗原性指数和柔韧性等参数综合考虑。