能否用酶联免疫吸附法测定食品中的三聚氰胺.pptVIP

Here comes your footer 能否用酶联免疫吸附法测定食品中的三聚氰胺 ? 三聚氰胺（ C3N6H6 ） 三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有机化工原料，广泛应用于塑料、涂料、粘合剂、食品包装材料生产。 三聚氰胺的含氮量高达66.6%，因此，三聚氰胺常被不法商人用作食品、饲料添加剂，以提升食品、饲料检测中的蛋白质含量指标。 农业部已明令禁止在饲料和食品中人为添加三聚氰胺，对非法在饲料中添加三聚氰胺的，依法追究法律责任。 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 目前，国内检测三聚氰胺的方法主要是高效液相色谱法，确证方法是气相质谱联用法，但这两种方法比较复杂、耗时，而且检测成本较高，会浪费大量的人力物力。 而酶联免疫吸附法(ELISA)具有特异性高、灵敏度高、稳定性好、操作简单，并可同时对大批量样品进行快速检测的特点，目前广泛应用于食品中兽药、毒素检测的初筛中。 但是酶联免疫吸附法对样品基质反应敏感，并非所有样品都能够采用酶联免疫吸附法进行初筛。 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 Abraxis三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒 Abraxis三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒 检测原理： 由于三聚氰胺为小分子抗原，本试剂盒采用竞争ELISA法原理设计并实现对三聚氰胺的检测。 样品中的三聚氰胺与一定量的（辣根过氧化物酶 ）HRP标记的三聚氰胺竞争结合固相上的三聚氰胺抗体，洗涤除去未结合的三聚氰胺和HRP标记的三聚氰胺。加入底物溶液，结合在固相上的HRP将无色的底物转化为 蓝色的物质。样品中三聚氰胺量 含量愈多，结合在固相上HRP标记 的三聚氰胺愈少，最后的显色也 愈浅，OD值越低。 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 检出限 检出限 从实验结果中可以看出，本批次的Abraix三聚氰胺检测试剂盒对奶制品中三聚氰胺检测有着较为理想的结果［相对标准偏差(RSD)10%］，并且能用于成品饲料、肉类基质中的三聚氰胺的检测(相对标准偏差≤18.1%)。 而对饲料原料的检测，采用酶联免疫法时，并不是所有的饲料原料都能满足现时的限量需求，造成差异的可能原因应该是饲料原料基质的复杂性，破坏了整个酶联免疫反应体系。 回收率 回收率 根据线性回归方程计算出样品添加三聚氰胺的浓度减去空白样检测浓度(20μg/L)除以实际添加的浓度，再乘以100%即为三聚氰胺的回收率。 回收率 表2所示，酶联免疫试剂盒对奶制品中的三聚氰胺检测均具有较为良好的检测能力，均满足我国规定的临时限量值的要求。 回收率 表3表明：酶联免疫试剂盒对成品饲料中的三聚氰胺残留的检测也能达到较为理想的结果，并且其检测范围也完全符合饲料原料和饲料产品中三聚氰胺限量值2.5 mg/kg的规定。 回收率 酶联免疫吸附法检测三聚氰胺 三聚氰胺的ELISA进口检测试剂盒主要有美国Abraxis、Beacon以及Strategic Diagnostics公司的产品，其中Abraxis公司的三聚氰胺检测试剂盒由于快速、可靠，在国内应用最为广泛。 ELISA方法由于高通量、简单、快速，在食品检测中应用非常广泛，但是该方法存在一定的假阳性，只能作为一种筛选方法，其阳性结果必须经相应的确证方法确证。 因此虽然验证结果显示ELISA方法检测乳制品和肉类中三聚氰胺都可以满足1 mg/kg，但是检出的阳性结果必须经过液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)确证。 * ? Page * 第4小组成员： 陈琦、陈关锋、陈朝晖 诸世楠、宣建锋、连翔 为了确证酶联免疫吸附法是否能成功应用于不同的样品基质中，我们小组从网上选取了一个以美国Abraxis的三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒对奶制品、成品饲料、饲料原料、肉类等不同的样品基质中的三聚氰胺含量进行检测的实验 。 并根据其实验结果判断酶联免疫吸附法检测三聚氰胺的可行性。 试剂盒应在 4–8℃保存，在使用前试剂盒内的所有试剂都要回温到室温(20-25℃)在有效期内试剂可以一直使用 。 1. 配制标准工作液 精确称取10.05 mg三聚氰胺标准品至100 ml容量瓶中，用70%甲醇定容至100 ml，溶液中三聚氰胺的浓度为100 mg/kg，2～8℃保存。 2.加标样品的制备 取已知阴性样品。奶粉按0.5、1.0、2.5 mg/kg3个浓度水平进行添加;液