农药残留的测定方法.pptVIP

一、免疫分析技术 免疫分析法是利用抗原和相应抗体在体外也能特异性结合的原理发展起来的特异、灵敏、快速检测技术，由于其内在优势，广泛应用于包括农药残留检测在内的诸多领域。 用免疫分析法检测农药残留，所面临的两个主要问题是农药抗体的制备和所制备抗体的特异性。农药是小分子化合物，其本身不能使动物产生抗体，只有适当的载体蛋白偶联成大分子物质，才能诱导免疫动物产生相应抗体。因此，制备质量稳定的农药抗体具有相当的难度。 1、抗原——抗体结合位点 2、抗原抗体反应的特征——“Lock and Key” 模式 3、抗原抗体结合的最佳比例 4、抗原抗体反应的最佳温度条件 MIT国内文献报道情况： MIT用于农药残留检测的实例： MIPs能特异性吸附作为印迹分子的待测物，在免疫分析中用生物抗体代替，有人称之为“塑料抗体”。 阿特拉津MIP，检测限达5 nmoL/L，6个月存放期内识别特性稳定，与1-100 nmoL/L的阿特拉津结构类似物无干扰。商品化的阿特拉津MIP-石英晶体微天平传感器，检测限达2.0×10-6 moL/L。与生物抗体相比，MIP稳定性好、制备周期短、费用低、易保存和可在粗糙环境中应用等。研究显示阿特拉津MIP与阿特拉津单克隆抗体（mAb）的反应情况基本类似。MIP代替抗体检测2, 4-D，检测限为10-3 nmoL/L。 三、酶抑制法 （一）酶抑制法的本质 昆虫神经冲动传导的基本过程：当神经冲动到达神经末梢（突触）时，突触小泡内的Ach外排至突触间隙，作用于突触后膜的AchR，引起下一级神经元或效应器的激发。正常生理条件下，Ach完成传递冲动作用后，随即被突触后膜上的AchE在数毫秒内水解，生成乙酸和胆碱。 1、神经性毒剂对AchE的抑制机理 神经毒剂分子含有亲电的正磷原子，它与Ach分子中的正碳原子同样具有亲电性质。但神经毒剂的亲电能力比Ach强，这是因为农药分子中P＝O和P-F键上的O、F原子相对电负性比P原子大得多，所以神经毒剂对AchE有更大的亲和力和抑制力。 2、对胆碱酯酶的抑制作用 假阳性——胆碱酯酶根据其水解基质的专一性和速度的不同分为真性胆碱酯酶和假性胆碱酯酶，前者为乙酰胆碱酯酶（AchE），后者包括丁酰胆碱酯酶和丙酰胆碱酯酶。 假阳性：水果、蔬菜的提取物中含有对AchE有抑制作用的杂质，如氯代烟碱类物质。产生假阳性的原因： （二）酶抑制检测法的原理 （三）酶抑制检测法的操作程序 （四）酶抑制检测法的发展情况 酶片等是固定化有敏感酶类的滤纸片或类似载体物质，检测时不需仪器，便于携带和现场操作。比如从面粉中提取植物酯酶制作酶片，可在5-10 min内检测蔬菜中常用的几种有机磷农药，检测限为0.04-10.0 mg/L。我国军队系统卫生监测中心食品安全研究室在国家科技攻关计划资助下，研制了测定有机磷农药的酶纸片，并与光反射技术结合，研制出测定有机磷的速测仪，组装了速测箱，已在“神州四号”发射的饮食卫生保障中进行了初步试用，并且取得了较为理想的效果。 四、敏感性指示生物测定技术 从自然界筛选对生长环境中有毒化合物敏感的物种，可以作为环境监测工具。研究人员发现用淡水微藻C. moewusii 和C. vulgaris检测水中的百草枯和乙丙隆，以使生长率降低50%的浓度（EC50）作为最低检测浓度，百草枯对C. moewusii的EC50为0.28μmoL/L，乙丙隆对C. vulgaris 的EC50是0.15μmoL/L。Silva等试验了一种来自大西洋的银边鱼（Silverside）对五氯酚和2, 4-D的敏感性，两种农药使该鱼生长率被抑制50%的浓度（EC50）分别为23μg/L和240 mg/L。陈良燕等用掖单4号玉米建立生物测试模式，可以有效用于检测水样中甲磺隆的残留量。 用于农药残留检测的敏感性指示生物，要求生活周期要短、容易操作且检测成本低，可考虑作为一种在基层应用的大面积生态环境监测手段。 四、色谱检测技术 色谱法是农药残留测定的主要方法。色谱法有很强的分离不同化合物组分的能力。色谱法分离混合组分是借助于色谱柱中具有很大表面积的固定相和流动相实现的。各种组分在流动相的推动下，以不同的路线和分离方式，通过流动相向前运动。由于各种组分在两相间分配上的差异，当依次运动到固定相另一端时，各组分迁移距离的差异导致它们按一定的被顺序被分离。流动相可以是气体也可以是液体。流动相为气体的，称为气相色谱；流动相为液体的，称为液相色谱。 （4）抗原（药物）测定——以阻断ELISA为例 阻断ELISA的基本原理及操作步骤 阻断ELISA是将抗体吸附在反应板的小孔孔内，然后将待测药物和定量的酶标药物加入孔内并混匀。将反应板置于适宜温度下温育一定时间，待酶标药物与未标记药物的竞争结合反应达到平衡后，洗去未同抗体结合的游