人乳头瘤病毒hpv核酸检测对比分析 课件.pptVIP

但是，由于HPV所致感染越重，涂片中挖空细胞出现几率越少，感染越轻，挖空细胞出现几率越高，所以，单靠细胞学诊断HPV感染敏感性较差。有研究报告显示，细胞学检查的敏感性只有51%-66%，其漏诊率高达35%-50%。 卫生部《宫颈癌筛查及早诊早治指南》指出， TCT阴性，要求每年同样要检查，HPV阴性，可以把筛查时间延长到3-5年。所以，其阴性价值不高。 第三种方法是HPV核酸检测，HPV检测可单独使用，也可和细胞学联合使用。对宫颈癌初筛，可有效减少细胞学方法的漏诊，联合使用法检测率几乎达到100%。由于HPV感染至癌潜伏期达5~15年，故可适当延长筛查时间，2003年卫生部制定的《宫颈癌筛查及早诊早治指南》建议连续两次HPV检测和细胞学检查正常克延至5~8年后检查。 对宫颈高度病变手术治疗后的患者，HPV可作为疗效判断，预测其病变恶化或术后复发的评估指标。研究显示，CIN经锥形环切术后复发率仍有3.03%-47.3%，术后HPV清除一般在8-10个月。若术后6-10个月，HPV持续阳性且病毒负荷量呈升高趋势，表明病变残留或复发，应及早干预；若HPV检测呈阴性，表明病灶切除彻底，基本不会复发。 所以，中国癌症研究协会推荐：HPV核酸检测+液基细胞检查作为宫颈癌筛查的最佳方案。 醋酸白试验---定义：人类乳头瘤病毒感染的上皮细胞与正常细胞产生的角蛋白不同，能被冰醋酸致白。方法：以棉签清除局部分泌物后，蘸5%冰醋酸涂在皮损及周围正常皮肤黏膜，2~5分钟后观察，皮损变为白色、周围正常组织不变色为阴性。相关疾病：与人类乳头瘤病毒相关的疾病有，尖锐湿疣、宫颈癌等。试验原理：变白是蛋白质凝固的结果，由于HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的角蛋白不同，前者可被醋酸脱色变白而后者则不变白。醋酸白试验的敏感性很高，对确诊HPV感染特别是亚临床感染很有帮助。但其他原因引起的慢性炎症致上皮增厚时也可出现假阳性反应。假阳性反应发白区的界限不清和不规则。 我将用30分钟的时间，从以下三个方面和各位专家交流沟通，一，HPV与宫颈癌的关系；二，宫颈癌的检测方法；三、HPV核酸检测方法学比较；最后将用5分钟和大家互动探讨。 第一代核酸检测试剂，以HC2为代表，其特点是，不分型、检测时间长 我们已经知道，高危固定价HPV的持续性感染是宫颈癌的主要病因，所以，第一代的产品已经不能很好满足临床需要。 在此基础上，先后有多个厂家开发了第二代的产品，比如凯普21型、亚能23型、透景26型、达安19型、港龙29型等等 他们共同的特点是可以分型，而且高低危都能做；需要杂交、时间长，5-10个小时不等；开放式杂交、极易导致实验室生物污染；结果需肉眼判读，增加人为误差。 随着科技的进步，2009年底，上海之江应用PCR必威体育精装版技术，推出了实时荧光定量PCR检测试剂。 实时荧光定量PCR原理 　　所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 1. Ct 值的定义　　在荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数（如图1所示）。 2. 荧光域值（threshold）的设定　　PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold = 10 ′ SDcycle 3-15 3. Ct值与起始模板的关系　　研究表明，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代Ct值。因此，只要获得未知样品的Ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。 4. 荧光化学　　荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。现将其原理简述如下： 　　1）TaqMan荧光探针：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5－3外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。而新型TaqMan-MGB探针使该技术既可进行基因定量分析，又可分析基因突变（SNP），有望成为基因诊断和个体化用药分析的首选技术平台。 　　2）SYBR荧光染料：在PCR反应体系中，