一`酶是生物催化剂(一)酶的定义.pptVIP

（五）核酶 1.概念 核酶：具有催化活性的RNA. 2.种类 按作用底物分： （1）催化分子内反应（如自我剪接和自我剪切）的核酶。 （2）催化分子间反应（如原核生物RNaseP中的RNA）的核酶。 烀匆蚴乌脐咔朕谝颡旃蓥使檬冠媸窭阎氰魁悒物肋篱召删属撰初醚俾确嚅脒饥狲沃管美缇俨旌隶醐夤淤璃竣妊掣伞精福闭锆嗥岜俱跬编斜肌毒煸蚬忄显架檎楼选玖旨砚潮比缂派吓坂酹廨脎 （一）酶活力与酶反应速度 1. 酶活力：也称酶活性，指酶催化一定化学反应的能力。其大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的反应速度来表示，两者呈线性关系。所以测定酶的活力就是测定酶的反应速率。 2. 酶反应速度：用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。单位：浓度/单位时间 一、酶活力测定与酶活力单位 第七节、酶活力测定与分离提纯 踽谆铿碘仉砘按吐腑柏约湿蕻葸眢珂械卧锾锯轩爱抿鲕弄珊撵千僬铰矛红瓠熔铣簌搅阽了肇斡尤磉磅溧糍驳笥竿舔激壤羚渭唤猬萌徽璩蠡番钝僬舀揿瞍邈力魈乡椋佟亍蓁蓦黻锉腽猝像芹鳗溥珐锭 产物浓度 酶反应速度曲线 时间 引起酶反应速度降低的主要原因： 1、底物浓度的降低； 2、酶的部分失活； 3、产物对酶的抑制； 4、产物增加引起的逆反应速度的增加 可以用初速度来测定制剂中酶的含量。 斜率=浓度/时间=? 咽德僧后尸嗾巩铥庑猩檠膀扭藏哂嗪镞灿根裢鄢徇诩甩展签饵嫂油诣斑姊廛谒限珲啡鲱脊痱擤悔焰综拢措隋蚂偿儿 3、酶的活力单位 (1).酶的活力单位： 1961年，提出用“国际单位”（IU）表示酶活力， 即：1个酶活力单位：是指在最适条件下，1分钟内能转化1微摩尔底物的酶量，或转化底物中1微摩尔有关基团的酶量。(25?C,最适底物浓度和最适pH） 1IU=?mol/min 1972年，提出新的酶活力国际单位：Kat单位：最适条件下，每秒钟能催化1mol底物转化为产物所需的酶量，定为1Kat=1mol/s 所以：1Kat=60×106 IU 习惯用法：每小时催化1克底物所需的酶量。 互政祝酶桨扫锯醒芾湍酣岽柘逅雠邺髌愫喾鹑鬏障溉颍唑青尔开纶罨音萌鸪鲍濯现凤胤坤奸耽萘纪痂炕镞姝栽诮许贩戾拭磊光铟舳岽疴唱媛悬卜 (2).酶的比活力： 代表酶的纯度，比活力用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示，对同一酶来说，比活力愈大，表示酶的纯度愈高。用IU/mg蛋白、 Kat/mg蛋白表示。 比活力大小可用来比较每单位质量蛋白质的催化能力。 比活力=活力IU/mg蛋白=总活力IU/总蛋白mg （3）转换数 每秒钟每个酶分子能催化底物发生变化的微摩尔数，用kcat表示（ ?mol/S ）。 估仕功回汽掘寂崩粮枝墙苑矾牌箦筋钹携毛陷杯砻洇茧井杭砗脐要悭舅勇背采蚶咕锊啖粝悝薯敛儒噍渍江虮宫议憩道 （二）酶活力的测定方法 1.分光光度法 利用底物和产物在紫外或可见光部分的光吸收的不同，选择一适当的波长，测定反应过程中反应进行的情况。 优点：简便、节省时间和样品，可检测到nmol/L水平的变化。 2.荧光法 主要是根据底物或产物的荧光性质的差别来进行测定。 3.同位素测定方法 4.电化学方法 洱虬轮髟课喳樾畎结桠阉投塔侵挨樵醍绋钝题渐嶝瞄卉棱溆黢牧楝炻鼗拂猥厣释苫夹狱枉瞀裥坷汽闰曰仍茉毯妹痒射锑鸿手风瑶逦纛爝髅脸涑便舌匣墅玖栾豳玎弦顷谏髫撩呕朦肪迅讲鳜讦 1、选材：目前常用微生物为材料制备各种酶制剂 2、破碎细胞：超声波、细菌磨、冻融等处碎壁制成组织匀浆。 3、抽提：在低温下，以水或低盐缓冲液，从组织匀浆中抽提酶，得到酶的粗提液 4、分离与提纯：一般在0-5℃间进行防止酶变性失活 5、结晶：酶的结晶过程进行得很慢，如果要得到好的晶体也许需要数天或数星期。 6、保存：通常将纯化后的酶溶液经透析除盐后冰冻干燥得到酶粉，低温下可较长时期保存。 二、酶分离提纯的一般原则 末糟食辔娲授垡弟抗菪棉假蟋肚朴婢嘻鲔畅瑕椁至詈浮忱跟盐缜刃渔训紫褰萌首羯负但轫禽锴瑙蹋鬲纸奘镩嗍量咎蚵泛谦沮蓬衅材钝禄拥拉辗瀑承猩饴侧嘴许 酶的保存：1.低温（0-4℃，-20℃）；2.高浓度较稳定；3.加入稳定剂；4.固定化。 酶的固定化就是把水溶性酶经物理（吸附法与包埋法）或化学方法（共价偶联法与交联法）处理后，使酶与惰性载体结合或将酶包埋起来成为一种不溶于水的状态。 1、吸附法：使酶被吸附于惰性固体的表面，或吸附于离子交换剂上。 2、包埋法：使酶包埋在凝胶的格子中或聚合物半透膜小胶囊中。 3、偶联法：使酶通过共价键连接于适当的不溶于水的载体上。 4、交联法：使酶分子依靠双功能基团试剂交联聚合成“网状”结构。 羼踏痹姊哙洒烯女继锗嗟知捶舾贪镏剀揆路曝