药学毕业论文--冬虫夏草对抗体形成细胞的作用研究.doc

冬虫夏草对抗体形成细胞的作用研究 作者：姜涛，刘蛟，杜镇镇，王志强，宓伟 【摘要】 　　目的观察冬虫夏草对小鼠抗体形成细胞的作用。方法用100%浓度冬虫夏草浸出液定期给小鼠灌胃，然后进行小鼠抗体产生能力检测、特异玫瑰花环结形成细胞检测（SRFC）、血清IgG检测。结果用药组以上3项免疫学指标均增高。结论冬虫夏草有明显促进抗体形成细胞的作用。 【关键词】 冬虫夏草； 免疫功能；小鼠 　　Abstract:ObjectiveTo study the effect of CSS on the antibody cell formation of mice. MethodsThe mice were orally adminitrated 100% water extract of CSS regularly,the ability of antibody formation,specific rosette cell formation(SRFC) and serum immunoglobulin were tested.ResultsThe immune function in the SCC group was improved remarkably compared with that in the control group.ConclusionCSS could enchance antibody cell formation obviously. 　　Key words:Cordyceps sinensis Sacc ; Immune function； Mouse 　　冬虫夏草，始载于《本草纲目拾遗》。因其冬季为虫，夏季为草，故名。为麦角菌科真菌冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk.) Sacc，寄生蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体。主产于四川阿坝藏族自治州松潘、理县、茂汶羌族自治县、甘孜藏族自治州、德格、道孚、青海玉树、果洛藏族自治州及同德、同仁，云南中甸、德钦、丽江纳西族自治县等地，均为野生。主要功效：益肾补肺，止血化痰，止嗽定喘［1］。本实验主要研究冬虫夏草对抗体形成细胞作用，旨在为冬虫夏草的临床应用提供科学依据。 　　1 器材与方法 　　1.1 仪器和药物 　　 　　低温冷冻离心机（Beckman,美国）；美国Multiskan产全自动酶标仪；恒温水浴箱（上海）；电泳仪（上海）；100目不锈钢网。冬虫夏草（购于附属医院中药房），取100 g加水1 000 ml，文火煎煮2 h，去渣浓缩为100 ml（浓度为100%）备用。 　　1.2 动物及分组 　　取BALB/C纯系小鼠24只，体重18～22g，雌雄各半，随机分为两组，每组12只，Ⅰ组为生理盐水对照组，Ⅱ组为药物实验组。 　　1.3 方法 　　Ⅰ组用生理盐水灌胃，1次/d，0.5 ml/(次·只)；Ⅱ组用冬虫夏草液灌胃，1次/d，0.5 ml/(次·只)，共灌10次。 　　1.4 检测项目 　　1.4.1 定量溶血分光光度测定法（QHS）［2］ 　　本法体外测定B细胞产生分泌抗体裂解红细胞所释放的血红蛋白量（以OD值表示），其结果可反映机体体液免疫功能。实验第5 天分别将5%的绵羊红细胞0.2 ml注入各组小鼠腹腔内。第11 天颈椎脱臼处死小鼠，常规取脾脏，然后脾细胞计数，调整细胞浓度至1×107/ml，平均每组每只小鼠设3支试管，每管依次加脾细胞悬液，0.2%绵羊红细胞（SRBC），1∶10新鲜豚鼠血清（补体）各1 ml混匀。另外分别设补体、脾细胞以及SRBC对照管各3支，置37℃水浴温育1 h，2 000 r/min离心5 min。取上清液用96孔细胞培养板于全自动酶标仪450 nm波长处测OD值，作为QHS反应值。 　　1.4.2 特异玫瑰花环形成细胞检测（SRFC）［3］ 　　取脾细胞0.1 ml（1×107/ml），1%SRFC 0.1 ml，小牛血清0.1 ml，试管内混匀，4℃放置2 h，加结晶紫溶液20 μl，计数500个淋巴细胞，求出SRFC/106脾细胞的形成率。 　　1.4.3 血清IgG检测［3］ 　　采用对流免疫电泳实验，摘除小鼠眼球取血，分离血清，取不同稀释度血清10 μl加入阴极端琼脂板孔中，将琼脂板阳极端孔内加入羊抗鼠IgG(1∶32)10 μl，将对流免疫电泳通电30 min后观察结果，以血清最高稀释度仍有明显沉淀线为准。结果以稀释度表示。 　　2 结果 　　2.1 冬虫夏草对抗体形成细胞的影响 　　表1结果显示，用药组可促进抗体细胞形成，与对照组相比有显著性差异（Plt;0.05）。表1 冬虫夏草对抗体形成细胞的影响(略) 　　2.2 冬虫夏草对SRFC的影响 　　表2结果显示，用药