血小板计数法课件.pptVIP

微生物血球计数板直接计数法 血球计数板基本构造： 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分割成两半，每个半边上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数室。 计数室刻度有2种： 16中格x25小格 25中格x16小格 它们都是由400各小格组成。 每个大方格边长为1mm,则每个大方格面积为1mm2 。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以每个计数室的体积为 0.1x1x1=0.1mm3 ， 每个大格有400个小格，所以每个小格的体积为 0.1/400=1/4000mm3 =1/4000,000ml 血球计数板的分区与分格 材料与仪器 1、待测样品：酵母菌悬液 2、仪器：显微镜，血球计数板，接种环， 盖玻片等 方法与步骤 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上盖玻片。 2、取稀释到一定程度（5-10个酵母/小格）酵母菌液，从盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。 3、每个样品重复计数2-3次，计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线及左方线的菌体。 5、计数方法： 样品中菌数/ml =每小格平均菌数x4000，000x稀释倍数 本实验采用25x16规格，要求数80个小格。 设：每个中格的菌数为A，则 每个小格平均菌（A1+A2+A3+A4+A5)/80 样品中菌数/ml = （A1+A2+A3+A4+A5)/80 x4000,000x稀释倍数 结果记录 微生物名称 总菌数 个/ml 测定注意事项 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母凝聚沉淀。 2、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方线和左方线上的菌体。 3、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即可作为两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母细胞。 * * 基本原理： 此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行测定。 它观察在一定的容积中的微生物的个体数目，然后推算出含菌数，包括死、活细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出的结果往往偏高。 这种方法常用于个体较大的菌体或孢子。 例一 1大格=16中格 =16X25小格 =400小格 数25x4=100小格 例二 1大格=25中格 =25X16小格 =400小格 数16x5=80小格 平均 第二次测定 第一次测定 第五个中格 第四个中格 第三个中格 第二个中格 第一个中格