免疫检测的自动化及标准化.ppt

免疫检测的自动化及标准化 蚌医一附院检验科 王凤超 免疫分析技术 经典的免疫分析技术 　凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验 　特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实现自动化。 现代的免疫分析技术 　荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系（稀土）元素免疫标记、临床化学免疫分析技术、发光免疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。 　特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。 荧光免疫标记技术 1950年Coons合成异硫氰酸盐(荧光染料)，用作标记抗体做小鼠组织切片染色，开创了免疫荧 光技术（immunofluorescence techniques）,又称为荧光抗体技术（Fluorescent antibody ） 传统免疫荧光技术：荧光显微镜下分析荧光状态、分布，及流式细胞仪，荧光偏振分析 现代免疫荧光技术 ：荧光激活细胞分类仪（ FACS )，荧光自动化分析测试仪 、时间分辨荧光技术（TRF ) TRF：以稀土离子(镧系元素）标记抗原或抗体，稀土原子具有荧光发射峰谱范围窄、激发光波长范围宽的特点，有利于增强荧光的特异性，提高分辨率；排除非特异性荧光的干扰、降低本底荧光。具有标记物制备简便、有效期长、不污染环境、操作流程短、标准曲线线性范围宽，高灵敏、高特异、有效期长、易于实现自动化、应用范围广等优点。 放射性免疫标记技术 1958年，美国科学家贝尔森和雅洛把放射性“标记”引入免疫分析，两人也因此获得了1977年的诺贝尔生理学奖。早期的研究都是以I131 (α射线和γ射线)作为标记的，目前用的是高纯度、高活性的I125(弱γ射线)，以减少放射性核素对人体健康潜在的影响。 优点：高灵敏、高特异 缺点：同位素半衰期及污染问题、试剂有效期短、反应时间长、批间批内的差异、标准曲线稳定性差、不易实现自动化。 从90年代开始放免分析在国际上每年以10％的速度下降。随着时间的推移，将会被新的技术方法取代。 磁微粒分离技术 2-3um的超顺磁性磁微粒作为实现免疫反应结合物与反应混合物的分离载体 其核心制造技术是在超顺磁性磁微粒的表面大量偶联了特异性结合抗体 参加反应后的免疫磁微粒通过一个外加磁场吸附下来，然后把其它杂质去掉 免疫反应在反应状态上，相比微孔板式的固相反应(固液界面反应)优化成了准液相反应，反应面积、几率大大增加，其反应速度大大加快。 制备的试剂具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、结果准确可靠的优点 动力粒子 : 酶免疫标记技术 酶免疫标记技术 酶免疫分析的自动化 酶免分析系统的标准化，自动化与网络化，是全实验室自动化（Total Laboratory Automation， TLA)系统的重要组成部分，包括样本(前处理)模块、酶免分析(后处理)模块、软件信息模块等，是迈向全面实验自动化建设的重要基石。 酶免疫分析的自动化 样本处理自动化 　主动标本识别条码阅读功能；更高的标本处理效率;更少的劳动强度;职业暴露机会最小化；通过减少人为失误、改善加样精度与准确性来改善分析质量，采用批量（batch )或随机(random access)进行多种组合与多种模式的检测 全自动酶免分析系统 　多任务、多通道，完全实现平行过程处理，特别是自由任务资源管理系统，可以随时增加(急诊)任务菜单，实现最优反应过程(实验质量)和最大化分析生产力( throughput) 。根据处理模式的不同，全自动酶免分析系统可分为两类，即一体机: 如EVOLIS. Alisei. Tecan，Personal LAB，变色龙等;分体机: 如AT和费米；斯达尔和费米;RSP和MPP3000等。 Microlab AT plus 2增强型全自动样本处理机 采用主动条码识别 12通道加样针 主动抛弃式加样头 容积从 10一300ul 96个标本加样速度小于 5分钟 可批量处理最多5块微板。 FAME (费米)全自动酶免分析系统 硬件上采用综合模块化设计，并行工作模式、双孵育双洗板、单读数模块 可容纳10块板，24个试剂位，30个密闭式孵育位 采用液体水平探测(LLD )、体积与重量传感、光学位置传感等技术，实现了真正的全过程控制( TPC )，尤其是专利的洗液传感器，确保了最佳洗板效果。 软件上采用 全自动GMP/GLP规范系统，如全面的系统跟踪记录（Traceability）与系统追溯（Traceability），标本／试剂加样校验 ( Sarnple verification) 及“自由任务管理”等功能。 哈美顿的辉煌之星 酶免之星 TECAN大型全自动酶免一体机  采用条码识别和试管架定位两种标本识别模式，可调式四维方式运动传输 加样头则使用一次性加样头与TEFLON钢针任意组合 加样速度高达1956