精品课件《禽病学》（完整版）禽病学实验指导.ppt

（一）血凝试验（HA）：取96孔板，按以下步 骤操作： 1、第一排1-12孔各加生理盐水50ul，第二排1-12 孔加生理盐水50ul为红细胞对照； 2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混匀后取50ul 至第2孔，依次稀释至第12孔，弃去50ul，各 孔经倍比稀释后稀释度依次为2-1~2-12 。 3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%鸡红细 胞50ul，微型震荡器震荡2min混匀。 4、室温静置10-30分，观察结果。 5、结果判定：红细胞对照组红细胞完全沉降，以试验排中能使等量红细胞发生完全凝集的病毒最高稀释倍数，作为病毒的血凝价，即HI效价，用2n表示。 3、第一、二排1-12孔各加4个单位血凝素50ul，微量震荡器震荡2min混匀； 4、室温静置20min； 5、第一、二、三排1-12孔各加1%鸡红细胞50ul，微量震荡器震荡2min混匀混匀。 6、室温静置10-30分，观察结果； 7、结果判定：第二排为抗原对照，红细胞应全部凝集，第三排为红细胞对照，红细胞应全部沉降。以待检血清能完全抑制病毒凝集红细胞的最高稀释倍数为血清的HAI效价，用2n表示。 实验步骤: 1 .准备鸡胚：接种前用检卵灯观察是否为受精卵 及其活力。 2 接种（绒毛尿囊腔途经）： （1）在检卵灯下，用铅笔勾出气室及胚胎的 位置，并在尿囊膜血管较少的地方作记号。 （2）消毒：用碘酒消毒气室蛋壳，酒精脱碘， 用灭菌钢针在记号处打一孔。 （3）接种病毒：用18mm针头的1ml注射器吸 取鸡新城疫病毒，针头通过打出的孔进针，刺入尿囊腔，注入0.1ml。 （4）用融化的石蜡封闭小孔，39℃孵化器中 孵化72h。 4、加样完后，将琼脂板置于湿盒中，37 ℃扩散24-48h。 5、结果判定：若待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线，则表示阳性，若不出现沉淀线，为阴性。 若用于检测血清效价，则以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示（2n）。 用于两种抗原比较时，沉淀线有多种情形，应具体分析。 实验步骤: （一）形态学检查：病料或心血涂片，瑞氏染色。 （二）培养特性检查：将病料接种于血琼脂平板 37℃培养24h。 （三）生化鉴定： * 实验一 新城疫血凝与血凝抑制试验 目的意义： 掌握血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HAI） 的基本方法； 体会HA与HAI在新城疫病毒及其它病毒诊断和鉴定中的应用。 基本原理： 许多病毒表面具血凝素，具有凝集某些动物或人红细胞的特性，称为血凝现象，可用于鉴定病毒。血凝现象可以被特异性抗体所抑制，称为血凝抑制现象，利用这种特性可进行血清学试验，称为血凝抑制试验。 器材及试剂: 待检病毒:鸡新城疫病毒鸡胚尿囊液； 待检血清：抗鸡新城疫病病毒阳性血清； 生理盐水、1%鸡红细胞、96孔V形微量血凝板、加样器等。 实验步骤 血凝试验流程图 （二）血凝抑制试验（HAI）：取一96孔板，按以下步骤操作： 1、4个单位抗原的制备：按HA试验测出的病毒血凝价除以4即为4个单位血凝素的稀释度。 2、待检血清的稀释：第一、二、三排1-12孔各加生理盐水50ul，于第一排第1孔中加入50ul待检血清，反复吹吸3-5次混匀后，取50ul至第2孔混匀，吸取50ul至第3孔……，依次稀释至第12孔，弃去50ul，经倍比稀释，血清的稀释倍数为21~212 。 血凝抑制试验流程 实验二 病毒的鸡胚培养 目的意义： 了解禽源病毒鸡胚培养的意义及用途 掌握病毒鸡胚培养的基本方法 基本原理： 鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的分离、增殖、毒力滴定、中和试验及生产疫苗等。病毒接种鸡胚的途径有多种，主要有卵黄囊接种、绒毛尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、羊膜腔接种途径等，应根据需要选择适当的途径。 卵黄囊 胚体 羊膜囊 绒毛尿囊腔 气室 鸡胚结构模式图 器材及试剂: 病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗； 鸡胚：9-11日龄白壳受精卵； 孵卵箱、检卵灯、钢针、注射器、2.5%碘酒、 75%乙醇、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。 3 收获： 接种后每4小时照蛋一次，弃去24h内死亡胚。 （1）鸡胚放入普通冰箱内冷藏12h，使胎血凝固。 （2）分别用碘酒和酒精消毒卵壳，用灭菌剪刀除去气室卵壳及壳膜，撕开下面的尿囊膜。 （3）将鸡胚稍倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液待检。 （4）观察鸡胚的发育及是否有无病变。 实验三 鸡白痢平板凝集试验 目的意义： 了解平板凝集试验在鸡白痢诊断及监测中的应