诱导痰的操作方法和临床应用2.ppt

概述 通过吸入雾化高渗盐水诱导痰液生成，并进一步分析痰液中细胞成分和上清液可溶性介质，以研究呼吸道疾病气道炎症性质及程度的非侵袭性方法。 始于1958年(Bickerman)，首次应用高渗盐水诱导痰液诊断肺癌，随后又被用于肺结核和卡氏肺孢子虫肺炎等呼吸道感染疾病诊断。1992年(Pin)改良高渗盐水诱导痰方法，并将其用于哮喘患者气道炎症的研究。 应用日益广泛，为哮喘、慢性阻塞性肺疾病、慢性咳嗽、肺结核、肺癌、肺部感染等疾病提供了一种无创、安全的检测方法。 适应症 了解哮喘、COPD等呼吸道疾病气道炎症的特点 研究气道炎症性疾病加重的原因 评价药物对气道炎症的作用。预期糖皮质激素的疗效，通过观察药物治疗前后诱导痰中细胞组分及炎症介质、分子生物学、免疫学改变。 协助肺癌、肺部感染、肺结核等疾病诊断 禁忌症 FEV1＜1L的任何患者 近期大咯血 哮喘中重度急性发作（加重） 急性或慢性呼吸衰竭 气胸或纵隔气肿 各种原因引起的大量胸腔积液或心包积液 严重心功能不全 活动性肺结核 诱导痰操作步骤 1 诱导前10min让患者吸入沙丁胺醇200-400μg 2 让患者用清水漱口，擤鼻 3 超声雾化仪以浓度为3-5%高渗盐水为患者进行雾化10-15分钟 4 受试者用清水漱口，将唾液尽量吐干，主动用力咳出深部的痰液到消毒容器中 雾化吸入程序 定时法：在固定的时间间隔内吸入浓度恒定 (如 3% ) 或渐增 (如3%, 4%, 5%)的高渗盐水。 　3％高渗盐水雾化吸入10-15min，用力咳痰至培养皿，痰量不足，则4％高渗盐水超声雾化吸入7min，不足，5％高渗盐水超声雾化吸入7min。 固定浓度法：吸入高渗盐水浓度不变，时间逐渐延长。 检查之前，排除有诱导痰的禁忌症的患者 严密监测FEV1：雾化吸入之前和间隔行肺通气功能检查，若FEV1下降20%，则停止 注意观察患者是否有气促、胸闷以及呼吸困难等不适症状，并向患者询问有无上述症状，若患者出现上述症状，立即停止诱导痰，并吸入短效支气管扩张剂。 累计雾化时间不超过30分钟 建议两次诱导痰操作应至少间隔 2天:频繁进行痰诱导能导致气道炎症，引起诱导痰中细胞数的变化。首次诱导后8～24小时重复诱导痰过程会引起第二次测量的嗜酸性粒细胞增高，对正常人在间隔48小时后重复痰诱导试验痰细胞计数有很好的重复性。 间隔2周重复性好,含量较少的淋巴细胞重复性最差,中性粒细胞与巨噬细胞则较好。 　　 痰标本质量评估 鳞状上皮细胞比例＜5% 低倍镜下：每个视野鳞状上皮细胞＞25个时，不管白细胞数量如何，均可视为不合格标本。 低倍镜下每个视野鳞状上皮细胞＜10个，白细胞＞25个，或鳞状上皮细胞：白细胞＜1：2.5为合格标本 痰液处理操作步骤 分析选择痰或分析整个痰 选择痰是用倒置显微镜选择没有唾液污染的来自下呼吸道的痰栓，包含所有黏液和密度高的部分。 整个痰则包括唾液和痰。 选择痰中活细胞数、细胞总数、嗜酸性粒细胞(Eos)计数及上清液嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)含量比整个痰高，鳞状细胞污染更少。 痰液处理操作步骤 用平口镊取出粘稠、密度大痰液部分放入EP管中 加入四倍0.1％二硫苏糖醇(DTT，可将糖蛋白纤维丝之间交联的二硫键打开从而溶解黏液 ,分散细胞而对细胞计数无影响 ），充分混匀痰混合物 将痰液置 37℃水浴 10 min,适当振荡加速痰液混匀化 痰液处理操作步骤 48μm的尼龙网过滤掉黏液和碎片 1000r/min离心5～10min。 计数沉淀细胞总数 涂片，HE染色或瑞氏染色，光镜下对500个非上皮细胞进行细胞分类计数 痰液处理最好在诱导痰后2h内完成。 尚无统一标准 　 健康人以中性粒细胞和巨噬细胞为主，淋巴细胞和EOS较少，其中EOS应小于1.0% Belda等对118例健康人(无鼻、胸部疾病、无哮喘或慢性呼吸系统疾病史、无过去或现在吸烟史、无气道高反应性)作诱导痰检测，结果显示：健康人诱导痰中细胞分类以巨噬细胞及中性粒细胞居多，以下以均数、中位数表示，细胞总数为 4.1，2.4×106/g，巨噬细胞为58.8，60.8%,中性粒细胞为37.5，36.7%，淋巴细胞1.0，0.5%，支气管上皮细胞为1.6，0.3%。 Hunter, et al.Chest,2002,121:1051-1057 健康非吸烟者BALF细胞学检测正常参考值: (1)细胞总数及分类计数:细胞总数(0.9-0.26)×109/L,其中肺泡巨噬细胞0.93±0.03,淋巴细胞0.07±0.01,中性和嗜酸细胞均0.01。 (2)T淋巴细胞亚群:总T细胞CD3+ 0.7,T辅助细胞 CD4+ 0.5,T抑制细胞 CD8+ 0.3,CD4+/CD8+比值1.5-1.8。 支气管肺