《结核分枝杆菌》课件.pptVIP

* 结核分枝杆菌 * 4、抗体检测 　检测PPDIgG辅助诊断。目前血清抗阿拉伯糖甘露糖脂IgG抗体是一种新的较好的诊断结核病的指标。 5、抗原检测 6、核酸检测 　快速诊断： PCR-特异性核酸探针 7、高效液相色谱分析技术 　测分枝菌酸可鉴定菌种 8、全血干扰素测定 * 结核分枝杆菌 * * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞 当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放r干扰素 r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子 * 结核分枝杆菌 * 由来----γ干扰素释放试验（IGRAs） IFN-γ在调节对结核分支杆菌的细胞介导的免疫反应中起重要作用，从而使得（interferon gamma release assays）IGRAs用于检测结核感染。IGRAs通过检测代表结核分支杆菌的抗原刺激T淋巴细胞反应后释放IFN-γ的量来判断是否存在结核杆菌感染。 * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—定义 以结核特异的混合抗原A和混合抗原B（分别为ESAT-6和CFP-10的部分多肽片断）刺激结核杆菌感染者外周血单核细胞中存在结核特异的活化T淋巴细胞分泌γ干扰素，从而应用ELISPOT方法检测对结核杆菌反应的效应T细胞数量，对结核杆菌感染进行辅助诊断。 特异抗原 ELISPOT * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—几个概念 ELISPOT（enzyme-linked immunospot assay,）是一种新型的免疫酶技术，它是从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞。（简单说：可以数出分泌特异因子的细胞的个数） ESAT-6和CFP-10蛋白：存在结核分枝杆菌及少数致病非结核分枝杆菌中名为“RD1”的基因序列，编码产生两种蛋白。在卡介苗菌株和大部分环境中的分枝杆菌基因中则缺乏次序列。 * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T-SPOT.TB技术： 利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中存在结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算计算对结核杆菌反应的效应T细胞数量 * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 包 * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 * 结核分枝杆菌 * 基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效 T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs * 结核分枝杆菌 * T-SPOT.TB的临床意义 T-SPOT.TB高灵敏度 * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—解释 非黄金标准 敏感性95.3%-98.8% 特异性94.1%-100% 萨斯分枝杆菌( My cobacter ium kans asii ) 、海分枝杆菌(My cobacter ium mar inum ) 、斯氏分枝杆菌( My cobacter ium sz ul gai ) 等少数分枝杆菌中也存在完整RD1区，编码ESAT??6 和CFP??10, 可造成检测结果成假阳性。 * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—应用 在活动性结核病中的诊断意义 1.敏感性86-94%，特异性89-99% 2.在肝移植术后、艾滋病、血液肿瘤等免疫抑制患者中， T-SPOT-TB阳性率略低于免疫正常组，但仍具有较高的敏感性，且优于结核菌素试验。 3.在肺外结核患者诊断中的，敏感性优于结核菌素试验。 4.对小于4岁儿童，与结核菌素实验比较敏感性无优势，美国CDC更推荐结核菌素实验。 * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—应用 在结核性脑膜炎、结核性胸膜炎中的诊断意义 1.敏感性优于ADA、TB-DNA，约在62-75%，特异性无统计学差异。 在结核病治疗中的评价意义 1.其数值高低与严重程度无关。 2.效应T细胞随结核杆菌的清除而消失，其阴性及阳性结果可作为评估治疗效果的手段之一 。 * 结核分枝杆菌 * T-SPOT-TB—应用 在潜伏性结核杆菌感染者的筛选中 1.敏感性优于结核菌素试验，且不受卡介苗接种影响。